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真核表達(dá)細(xì)胞的優(yōu)點:重組DNA易轉(zhuǎn)染,,遺傳穩(wěn)定,可重復(fù),;識別和去除內(nèi)含子,;進行翻譯后修飾;磷酸化,、糖基化,、二硫鍵,、寡聚體等的形成、高級結(jié)構(gòu)的正確折疊,;產(chǎn)品的構(gòu)型正確率高,,可被改造成類人體源性, 免疫源性好,;可分泌至培養(yǎng)基,,提純工藝簡單,成本低,;可用于基因治療,。細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)能誘導(dǎo)高效表達(dá),對表達(dá)的蛋白進行正確折疊,,并進行復(fù)雜糖基化修飾,,蛋白活性接近于天然蛋白,不需去除內(nèi)毒素,,周期較長,,操作復(fù)雜,需要細(xì)胞房,,無菌,,成本投入高。
真核表達(dá)細(xì)胞載體趨向于既有利于擴增目的基因又有利于篩選陽性克隆的載體的構(gòu)建,。許多有效的應(yīng)用范圍廣的強啟動子和增強子被人發(fā)現(xiàn)并應(yīng)用于載體中,,大大提高了目的基因的表達(dá)量,另外一些強的組成型啟動子,已應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn)的細(xì)胞系中,。
真核表達(dá)細(xì)胞表達(dá)產(chǎn)物在分子結(jié)構(gòu),、理化特性和生物學(xué)功能方面更接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子。
1.真核細(xì)胞結(jié)構(gòu)及基因組結(jié)構(gòu)遠(yuǎn)比原核復(fù)雜,,其基因表達(dá)調(diào)控機制發(fā)生在染色體活化,、基因轉(zhuǎn)錄激活、轉(zhuǎn)錄后加工,、翻譯及翻譯后加工等水平的調(diào)節(jié)事件也要復(fù)雜的多,。
2.原核基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)特點:
σ因子識別特異啟動序列,不同的σ因子決定特異基因的轉(zhuǎn)錄激活,,決定mRNA,rRNA和tRNA基因的轉(zhuǎn)錄,。
除個別基因外,原核生物絕大多數(shù)基因按功能相關(guān)性成簇的串聯(lián),、密集于染色體上,,共同組成一個轉(zhuǎn)錄單位——操縱子。一個操縱子只含一個啟動序列及數(shù)個可轉(zhuǎn)錄的編碼基因。