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重組人GDF3試劑盒具有的三種特性:
靈敏度:最小的GDF-3 檢測(cè)濃度小于30pg/ml,。特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的人GDF-3,。不與人其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng),。重復(fù)性:板內(nèi),、板見變異系數(shù)均小于10%,。
重組人GDF3其要求有哪些:
1. 生物活性:進(jìn)行相應(yīng)的體外或體內(nèi)活性檢測(cè),。
2. 純度:應(yīng)用兩種方法分析產(chǎn)品純度,。
3. 真實(shí)性:重組蛋白產(chǎn)品一致經(jīng)過(guò)N末端氨基酸序列分析,;必要時(shí)應(yīng)用SDS-PAGE, RP-HPLC和質(zhì)譜(MS)檢測(cè)其真實(shí)性。
4. 內(nèi)毒素:kinetic LAL法檢測(cè)內(nèi)毒素,。
5. 蛋白含量:通過(guò)紫外光譜分析,,電泳檢測(cè);必要時(shí)應(yīng)用HPLC定量標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液,。
6. 微生物:重組蛋白在裝瓶之前都經(jīng)過(guò)濾除菌處理,。
重組人GDF3檢測(cè)流程:
1. 加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘,。
2. 洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,,向?yàn)V紙上印干。
3. 每孔中加入第一抗體工作液100ul,。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘,。
4. 洗板:同前,。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘,。
6. 洗板:同前,。
7. 每孔加入底物工作液100ul,置37 ℃暗處反應(yīng)15分鐘,。
8. 每孔加入100ul終止液混勻,。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。