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重組人GDF3原核表達(dá)在表達(dá)當(dāng)中來說還是比較簡單,，細(xì)菌培養(yǎng)條件簡單,、生長速度快,，需要的儀器和培養(yǎng)基都比較便宜,。當(dāng)然,，它也存在一些缺乏高級(jí)修飾,、細(xì)胞內(nèi)部還原性過高等缺點(diǎn)。原核表達(dá)從一開始的設(shè)計(jì)就非常重要,，所謂好的開始是成功的一半,。要根據(jù)是否要求可溶將載體分成兩大類，可以同時(shí)嘗試多種表達(dá)系統(tǒng),，也有許多商業(yè)化的系統(tǒng)供選擇,。
重組人GDF3操作步驟：
1.使用前，將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。
3.加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí)。
4.甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
5.每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
6.甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
7.每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8.取出酶標(biāo)板,，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9.在450nm波長處測定各孔的OD值,。
