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分析三嗪類殺蟲劑的實驗方法
閱讀:927 發(fā)布時間:2020-2-24LC-MS/MS色譜流動相的制備
1M甲酸銨溶液:稱取63g甲酸銨,,溶于1L HPLC級的水中,。
流動相A:在1L水 (HPLC級) 中加入 5mL 1M甲酸銨溶液。
流動相B:在1L甲醇 (HPLC級) 中加入 5mL 1M甲酸銨溶液,。
樣品制備(水果與蔬菜基質)
基于Anastassiadies等人提出的方法[1]:
1. 稱量10g切碎的樣品,;
2. 加入100µL 內標溶液(D5 - Atrazine 1µg/mL);
3. 加入10mL乙腈,,劇烈振搖,;
4. 加入4g無水MgSO4和1g的NaCl;
5. 馬上渦旋混合,,以防止MgSO4共聚物的生成,;
6. 振搖30s后,4300r/min離心5min,;
7. 取出1mL初提液,,轉移至含有150mg無水MgSO4的離心管中,;
8. 混合,5200r/min 離心1min,;
9. 取出500µL上清液,,用水將稀釋到1mL,得到提取液濃度約為0.5g/mL,。
基LC-MS/MS于Klein和 Alder等人提出的方法[2, 3]:
1. 在5g或10g樣品中,,加入水到10mL;
2. 加20mL甲醇,,使用UltraTurrax 組織勻漿機勻漿2min,;
3. 有時需要過濾或離心;
4. 加入NaCl 溶液 (100mL水中含20g NaCl),,每6mL加入NaCl溶液2mL,;
5. 用5mL樣品溶液浸泡 ChemElut 柱;
6. 5min后,,用16mL二氯甲烷洗脫,;
7. 40℃揮發(fā)至干;
8. 用甲醇與水的混合溶液1.25mL (甲醇0.25mL,,水1mL) 重新溶解,;
9. 用0.45µm濾膜過濾。
基于Lehotay et al.[4]提出的方法:
1. 使用Molinex 混合器或類似設備勻質水果或蔬菜樣品,;
2. 加入乙腈,,(15.0±0.05)g 勻質的樣品加乙腈15mL,超聲提取2min后,,混旋5min,;
3. 加入6g無水MgSO4和1.5g NaCl的混合物,劇烈振搖1min,;
4. 3000r/min 離心5min,;
5. 取5mL上層溶液,加入1.8g 無水MgSO4和0.3g Bondesil C8 吸附劑,;
6. 振搖20s,;
7. 使用Eppendorf 5301型濃縮儀,或類似設備揮發(fā)至干,;
8. 用乙腈/水=1/9的溶液1mL重新溶解樣品,;
9. 12000r/min 高速離心2min;
10. 上清液轉入自動進樣器的進樣瓶中備用
色譜分離條件
Agilent 1100 系統(tǒng):G1312A二元泵系統(tǒng),、G1367A型自動進樣器,、柱溫箱。
色譜柱:Phenomenex Synergi Fusion-RP反相柱,,50mm×2mm,,粒徑4µm,,內孔80Å。
流動相:
A相—水+5mM 甲酸銨,;
B相—甲醇+5mM 甲酸銨,。
梯度設置:
API 3200™或3200 QTRAP® LC-MS/MS液質分析系統(tǒng)。TurboIonSpray® 離子源,,負離子模式,,MRM掃描方式。