組織病理切片以及HE染色
（一）實(shí)驗(yàn)原理：蘇木素-伊紅染色（hematoxylin-eosin staining，HE染色）能較好地顯示組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài),，可用于觀察,、描述正常和病變組織的形態(tài)學(xué),，而且HE切片可較長時間保存，被稱為常規(guī)染色方法,。
（二）實(shí)驗(yàn)步驟： 一,、制作切片
1、取材,、固定：取小鼠腎臟組織適當(dāng)大小,，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。
2,、組織的脫水,、透明、浸蠟與包埋
組織固定后還需經(jīng)過脫水,、透明,、浸蠟等過程才能制成蠟塊，進(jìn)行石蠟切片。脫水是指用某些溶媒置換組織內(nèi)水分的過程,。組織脫水后,，必須經(jīng)過一種既能與酒精相混合又能溶解石蠟的溶劑，通過這種溶劑的媒介作用,，使石蠟浸入組織塊,。在此過程中，因組織塊中的水分被溶劑所取代,，組織塊變得透亮,，因此稱之為透明。組織染色后也要進(jìn)行透明,。zui常用的透明劑為二甲苯,，處理時間為30min左右。
組織經(jīng)透明后在溶化的石蠟內(nèi)浸漬的過程稱浸蠟,。用其他浸透劑（如火棉膠,、碳蠟和明膠等）滲入組織內(nèi)部的過程稱為浸透或透入。為使石蠟充分滲入組織塊中,，常需經(jīng)過3小時的浸漬,，期間需更換3次石蠟。一般用于浸蠟的石蠟熔點(diǎn)為52-56℃,。
組織塊經(jīng)過浸蠟或浸透，用包埋劑（石蠟,、火棉膠,、碳蠟和樹脂等）包起的過程稱包埋，包埋后便制成含組織的塊,。這種包埋塊可使組織達(dá)到一定的硬度和韌度,，有利于切成薄片。石蠟包埋是病理日常工作中zui常用的包埋方法,。用于包埋的石蠟熔點(diǎn)一般為60℃左右,。但在有些情況下，如某些酶染色時,，則需采用低溫石蠟包埋,，以保存組織內(nèi)酶的活性。 3,、切片,、制片
石蠟切片常用的切片機(jī)有輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)和平推式切片機(jī)，以前者為多用,。切片厚度一般為3-5μm,。切片時先將組織片平攤于一塊玻璃上，迅速滴加30％的酒精水溶液使組織片*展開，再移入40℃恒溫?zé)崴髦?。也可直接將組織切片移入40℃的恒溫?zé)崴髦?，待組織片*展開后將其貼附于載玻片上，經(jīng)56-60℃烤片30-60min后即可進(jìn)行染色,。
二,、HE染色
1. 二甲苯脫蠟2×10 min；
2. 無水乙醇洗去二甲苯2×5min,；
3. 95％,、80％乙醇各l0 min，自來水洗l min（不要讓急水直接沖至載玻片上的組織）,，蒸餾水洗1min,；
4. 蘇木素染色4 min，自來水洗2 min,；
5. 1％鹽酸酒精分化20 s（鏡下控制）,，自來水洗2 min；
6. 1％稀氨水返藍(lán)30s（鏡下控制）,，自來水洗2分鐘,，蒸餾水洗1min；
7. 伊紅染色90s,；
8. 80％乙醇脫水10s,，95％酒精10s，無水乙醇5min,；
9. 無水乙醇10min,；
10.二甲苯2×10 min；
11.中性樹膠或加拿大樹膠封片,。
（三）實(shí)驗(yàn)結(jié)果：細(xì)胞核呈藍(lán)色,；細(xì)胞漿、肌肉,、結(jié)締組織,、紅細(xì)胞和嗜伊紅顆粒呈不同程度的紅色。鈣鹽和各種微生物也可染成藍(lán)色或紫藍(lán)色,。
（四）實(shí)驗(yàn)分析：HE染色時病理學(xué)中常用的一種診斷方法,，通常將病理切片染色后再在顯微鏡下觀察組織的病理學(xué)變化，從而做出病理學(xué)診斷,。
