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高校實驗室如何去觀察綠色熒光蛋白GFP,？
閱讀：8633 發(fā)布時間：2021-1-5GFP是什么,？GFP 綠熒光蛋白(Green Fluorescent Portein,，GFP)
綠色熒光蛋白是一類存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔腸動物體內(nèi)的生物發(fā)光蛋白,，當受到紫外或藍光激發(fā)時,，發(fā)射綠色熒光。其特點在于：它產(chǎn)生熒光無需底物或輔因子，發(fā)色團是其蛋白質(zhì)一級序列固有的來源于水母的氨基酸殘基組成,。水母的綠色熒光蛋白很穩(wěn)定,，無種屬限制，已在多種動植物細胞中表達成功并產(chǎn)生熒光,。GFP 的熒光受外界的影響較小,，另外GFP 的檢測十分方便，而對細胞的傷害小,。
綠色熒光蛋白GFP的發(fā)光特性：
GFP吸收的光譜峰值為395nm（紫外）,，并有一個峰值為470nm的副吸收峰（藍光）；發(fā)射光譜峰值為509nm（綠光）,，并帶有峰值為540nm的側(cè)峰（Shouder）,。雖然450～490nm只是GFP的副吸收峰，但由于該激發(fā)光對細胞的傷害小,，因此通常多使用該波段光源（多為488nm）,。此外，GFP的光譜特性與熒光素異硫氰酸鹽（FITC）很相似,，兩者通常共有一套濾光片,。GFP熒光極其穩(wěn)定，在激發(fā)光照射下,，GFP抗光漂白（Photobleaching）能力比熒光素強,，特別是在450～490nm藍光波長下穩(wěn)定。類似的,，GFP融合蛋白的熒光靈敏度遠比熒光素標記的熒光抗體高,，抗光漂白能力強，因此適用于定量測定與分析,。由于GFP熒光的產(chǎn)生不需要任何外源反應(yīng)底物，因此GFP作為一種廣泛應(yīng)用的活體報告蛋白,，其作用是任何其它酶類報告蛋白*的,。但因為GFP不是酶，熒光信號沒有酶學放大效果,，因此GFP靈敏度可能低于某些酶類報告蛋白,，比如螢火蟲熒光素酶等。
熒光蛋白激發(fā)光源的主要產(chǎn)品應(yīng)用：
檢測轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白（GFP）基因,、紅色熒光蛋白（DsRed）基因植物：水稻,、小麥、玉米,、大豆,、棉花、擬南芥
檢測轉(zhuǎn)GFP、DsRed基因動物：小鼠,、兔子,、猴子等；
檢測轉(zhuǎn)GFP,、DsRed基因微生物：細菌,、真菌、酵母等,；
檢測GFP,、DsRed基因組織特異性表達；
綠色熒光蛋白GFP的常規(guī)觀察方法有三種：
1.熒光顯微鏡
熒光顯微鏡(Fluorescence microscope) ： 熒光顯微鏡是以紫外線為光源,， 用以照射被檢物體,，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置,。熒光顯微鏡用于研究細胞內(nèi)物質(zhì)的吸收,、運輸、化學物質(zhì)的分布及定位等,。 細胞中有些物質(zhì),，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光,；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光,，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光,，熒光顯微鏡就是對這類物質(zhì)進行定性和定量研究的工具之一,。目前在常用的方法就是采用熒光顯微鏡觀察，熒光顯微鏡在實驗室普及,，但不足的是必須采集葉片或動物切片進行觀察,，對培養(yǎng)的標本進行破壞，無法進行活體觀察,。
2.紫外光源
采用紫外光源（又叫紫外線燈,、黑光燈）觀察也非常方便，但如果觀察植物,，植物葉片的葉綠色在紫外線燈下也會發(fā)出熒光,，對gfp發(fā)出的熒光也會產(chǎn)生干擾，另外,，標本長時間在紫外光源照射下對GFP標本組織也會造成破壞,。
3.便攜式GFP激發(fā)光源
采用便攜式GFP激發(fā)光源(又叫熒光蛋白觀測鏡）是便捷、方便的觀察方法,，因GFP在470nm有一個很高的吸收峰,，采用 470nm激發(fā)光源能夠激發(fā)GFP發(fā)出明亮的綠色熒光,，在觀察gfp熒光時，因為激發(fā)光為強烈的藍色光線,，佩戴專業(yè)的觀察眼鏡才能觀察到清晰的熒光信號,。推薦使用美國LUYOR-3260便攜式激發(fā)光源。因此,，使用便攜式GFP激發(fā)光源為方便有效的觀察辦法,。
下面為您推薦LUYOR-3415RG雙波長熒光蛋白激發(fā)光源
LUYOR-3415RG雙熒光蛋白觀察燈的產(chǎn)品優(yōu)勢：
1.大功率輸出，無需暗室,，也可輕松激發(fā)熒光,。
2.檢測效率高，黑暗中檢測一目了然
3.LED壽命50000h,，且系統(tǒng)穩(wěn)定,，可長時間使用
4.直接檢測，而無需用底物顯色,，所以安全,，對被檢測對象無傷害
LUYOR-3415熒光蛋白激發(fā)光源的物理技術(shù)參數(shù)：
波長：可任意選擇2種波長：365nm，400nm,， 450nm,， 485nm，520nm
質(zhì)量：凈重0.9kg,，毛重：4kg,，尺寸：180x200mm（長x高），頭部直徑120mm,。
功率：單波長15w,，總功率27w。
輸入電壓：交流100-260v,，頻率50/60Hz,。
包裝箱尺寸：400x300x150mm（長x寬x高）
距燈150mm處照射直徑為180mm
