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關(guān)于超聲波破碎儀破碎細(xì)菌

閱讀：708 發(fā)布時(shí)間：2022-4-8

細(xì)菌工程菌胞內(nèi)表達(dá)主要分為兩種形式,，一種是在強(qiáng)啟動子條件下的高效表達(dá)，由于蛋白的過度表達(dá),，使蛋白不能及時(shí)有效折疊而發(fā)生無規(guī)則卷曲，以固體顆粒的形式堆積于胞間質(zhì)中，這就是所說的包涵體,，另外一種是間質(zhì)內(nèi)的可溶性表達(dá)，即可以發(fā)生正常折疊,，具有生物活性,。一般情況下，細(xì)菌只要被正常破壁就可以通過離心的形式將包涵體和可溶性表達(dá)的蛋白分離開,。超聲破碎的條件一般是300w,，10s/10s，20分鐘,，具體條件可根據(jù)自身情況而定,。超聲前菌體的準(zhǔn)備：菌液離心后，先用PBS將菌沉淀洗2-3遍,，然后按原菌液體積的1/5-1/10加入裂解液重懸菌體,，裂解液的成分：50mMTris- HCl, pH8.0, 2mM EDTA，100mM NaCl,，加溶菌酶至100ug/ml,，0.1%Triton X-100,。切記冰浴超聲！

**一,、如何判斷是否超聲*,，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，一般有以下幾個(gè)方面：**

　　1,，外觀判斷：超聲前菌懸液是渾濁的,，超聲*后變的透明、清澈,。

　　2,，液體的粘性：超聲后菌液從槍頭滴下不粘連。

　　3,，高速離心：有用高速離心檢測超聲破碎程度的(一般用6,000 g 10 min, 比一般離心收集菌體的轉(zhuǎn)速高一點(diǎn)),。沉淀是未破碎或破碎不*的菌體。

　　4,，染色：破碎后的菌液涂片,，革蘭氏結(jié)晶紫溶液染色0.5分鐘，鏡檢,。

　　(超聲后加入核酸酶消除核酸對蛋白的污染)

二,、一些需要注意的問題：

　　1，蛋白以包涵體形式表達(dá),，追求的是高破碎率,，要求細(xì)胞碎片很小，而另一種蛋白是可溶形式表達(dá),，所以細(xì)胞碎片不能很小,，兩種情況要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分離,。

　　2,，如果超聲時(shí)出現(xiàn)黑色沉淀，說明超聲功率太強(qiáng),。

　　3,，超聲時(shí)間太長、功率太高對蛋白活性肯定有影響,。

　　4,，盡量防止泡沫的產(chǎn)生。

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**一,、如何判斷是否超聲*,，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，一般有以下幾個(gè)方面：**

1,，外觀判斷：超聲前菌懸液是渾濁的,，超聲*后變的透明、清澈,。

2,，液體的粘性：超聲后菌液從槍頭滴下不粘連。

3,，高速離心：有用高速離心檢測超聲破碎程度的(一般用6,000 g 10 min, 比一般離心收集菌體的轉(zhuǎn)速高一點(diǎn)),。沉淀是未破碎或破碎不*的菌體。

4,，染色：破碎后的菌液涂片,，革蘭氏結(jié)晶紫溶液染色0.5分鐘，鏡檢,。

(超聲后加入核酸酶消除核酸對蛋白的污染)

二,、一些需要注意的問題：

1，蛋白以包涵體形式表達(dá),，追求的是高破碎率,，要求細(xì)胞碎片很小，而另一種蛋白是可溶形式表達(dá),，所以細(xì)胞碎片不能很小,，兩種情況要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分離,。

2,，如果超聲時(shí)出現(xiàn)黑色沉淀，說明超聲功率太強(qiáng),。

3,，超聲時(shí)間太長、功率太高對蛋白活性肯定有影響,。

4,，盡量防止泡沫的產(chǎn)生。

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1,，外觀判 斷：超聲前菌懸液是渾濁的,，超聲*后變的透明、清澈,。

2,，液體的粘性：超聲后菌液從槍頭滴下不粘連。

3,，高 速 離 心：有用高速離心檢測超聲破碎程度的(一般用6,000 g 10 min, 比一般離心收集菌體的轉(zhuǎn)速高一點(diǎn)),。 沉淀是未破碎或破碎不*的菌體。

4,，染色：破碎后的菌液涂片,，革蘭氏結(jié)晶紫溶液染色0.5分鐘，鏡檢,。

(超聲后加入核酸酶消除核酸對蛋白的污染)

二,、一些需要注意的問題：

1，蛋白以包涵體形式表達(dá),，追求的是高破碎率,，要求細(xì)胞碎片很小，而另一種蛋白是可溶形式表達(dá),，所以細(xì)胞碎片不能很小,，兩種情況要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分離,。

2,，如果超聲時(shí)出現(xiàn)黑色沉淀，說明超聲功率太強(qiáng),。

3,，超聲時(shí)間太長、功率太高對蛋白活性肯定有影響,。

4,，盡量防止泡沫的產(chǎn)生。

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　　1,，外觀判斷：超聲前菌懸液是渾濁的,，超聲*后變的透明、清澈,。

　　2,，液體的粘性：超聲后菌液從槍頭滴下不粘連。

　　3,，高速離心：有用高速離心檢測超聲破碎程度的(一般用6,000 g 10 min, 比一般離心收集菌體的轉(zhuǎn)速高一點(diǎn)),。沉淀是未破碎或破碎不*的菌體。

　　4,，染色：破碎后的菌液涂片,，革蘭氏結(jié)晶紫溶液染色0.5分鐘，鏡檢,。

　　(超聲后加入核酸酶消除核酸對蛋白的污染)

　　1，蛋白以包涵體形式表達(dá),，追求的是高破碎率,，要求細(xì)胞碎片很小，而另一種蛋白是可溶形式表達(dá),，所以細(xì)胞碎片不能很小,，兩種情況要求不同但目的相同，都是便于后期的固液分離,。

　　2,，如果超聲時(shí)出現(xiàn)黑色沉淀，說明超聲功率太強(qiáng),。

　　3,，超聲時(shí)間太長、功率太高對蛋白活性肯定有影響,。

　　4,，盡量防止泡沫的產(chǎn)生。