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巨噬細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定
巨噬細(xì)胞是動(dòng)物機(jī)體內(nèi)重要的免疫細(xì)胞,， 具有抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等重要作用， 被廣泛應(yīng)用于體外免疫增強(qiáng)藥物的非特異性免疫功能,。有很多能從多種組織和器官中分離純化巨噬細(xì)胞,，但這些方法大多都是繁瑣、復(fù)雜,，所需時(shí)間長(zhǎng)且耗資較大,。本實(shí)驗(yàn)就以小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象， 探索建立一種巨噬細(xì)胞體外分離培養(yǎng)與鑒定簡(jiǎn)便的方法,。
首先選取一只小白鼠,，腹腔注射不含小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液5ml。輕柔小鼠腹部2-3min,，靜置5-7min后將小鼠頸椎脫臼處死，至于解剖板上,，無(wú)菌條件下打開腹腔,，用注射器抽取腹腔液，離心5min （1000r/min）,，棄上清,，用pbs洗滌2遍。再用含10%成牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液（0.1%雙抗溶液）調(diào)節(jié)至2×106ml-1,，接種于培養(yǎng)瓶及6孔板,，置5%的CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)2h，棄上清,。用不含小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液洗滌2遍,，然后加含有10%小牛血清的rpmi-1640培養(yǎng)液在37℃，CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),，倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),。
巨噬細(xì)胞的觀察與鑒定
然后稱取4g臺(tái)盼藍(lán)，加少量蒸餾水研磨,，加雙蒸水至100ml,，用濾紙過(guò)濾，4度保存,。使用時(shí),。用pbs稀釋至0.4%,。； 胰酶消化貼壁細(xì)胞,，制備單細(xì)胞懸液,，并作適當(dāng)稀釋。染色：細(xì)胞懸液與0.4%臺(tái)盼藍(lán)溶液以9：1混合混勻,；
在三分鐘內(nèi),，分別計(jì)數(shù)活細(xì)胞和死細(xì)胞。鏡下觀察,，死細(xì)胞被染成明顯的藍(lán)色,，而活細(xì)胞拒染呈無(wú)色透明狀。
瑞氏染色計(jì)算細(xì)胞純度
細(xì)胞涂片自然干燥后,，用蠟筆在兩端畫線,，以防染色時(shí)染液外溢。隨后將玻片平置于染色架上,，滴加染液3-5滴,，使其蓋滿涂片，大約1分鐘后,，滴加等量的染液,，用吸耳球輕輕混勻。沖洗：染色5-10分鐘用流水染液,，待干,， 結(jié)果觀察，將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察,。