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凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)緩沖液的更換
閱讀：1697 發(fā)布時間：2019-5-21
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)緩沖液的更換
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)及動力學(xué)研究，包括蛋白酶親和配基CHOM的制備,，蛋白酶的親和層析分離純化,，凝膠電泳鑒定及分子量測定，蛋白酶的動力學(xué)研究等,。分離純化蛋白質(zhì)是研究蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),、化學(xué)組成和生物功能的基礎(chǔ)。根據(jù)蛋白質(zhì)的不同性質(zhì),，分離純化的方法也是不同的,。
凝膠層析蛋白純化系統(tǒng)緩沖液的更換
雖然更換緩沖液不能提高蛋白純度，但它卻在蛋白純化方案中起著極其重要的作用,。不同的蛋白純化方法需要不同pH及不同離子強(qiáng)度的緩沖液,。
假如你用硫酸銨將蛋白沉淀出來，毫無疑問蛋白是處在高鹽環(huán)境中,，需要想辦法脫鹽,，可用的方法有利用半透膜透析，通過勤換透析液體去除鹽分,，此法尚可,，但需幾個小時，通常要過夜,，也難以用予大規(guī)模純化中,。
新型的設(shè)備將透析膜夾在兩個板中間，板的一側(cè)加緩沖液,，另一側(cè)加需脫鹽的蛋白溶液,，并在蛋白溶液一側(cè)通過泵加壓，可以使兩側(cè)溶液在數(shù)小時內(nèi)達(dá)到平衡,，若增加對蛋白溶液的壓力,，還可迫使水分和鹽更多通過透析膜進(jìn)入透析液達(dá)到對蛋白濃縮的目的。
也有出售的脫鹽柱,，柱內(nèi)的填料是小孔徑的顆粒,，蛋白分子不能進(jìn)入孔內(nèi)，先于高濃度鹽離子從柱中流出,，從而使二者分離,。
蛋白純化的每一步都會造成目的蛋白的丟失，緩沖液平衡的步驟尤甚。蛋白會結(jié)合在任何它能接觸的表面上,，剪切力,、起泡沫和離子強(qiáng)度的快速變化很容易讓蛋白失活。