細(xì)胞培養(yǎng)中的那些問(wèn)題

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       做細(xì)胞培養(yǎng)的同學(xué)如果互相交流會(huì)發(fā)現(xiàn)，不同的實(shí)驗(yàn)室有些規(guī)則是不一樣的,，初學(xué)者經(jīng)常不知對(duì)錯(cuò),，小編今天就和大家總結(jié)一下這些問(wèn)題,，希望對(duì)你的細(xì)胞之路有所幫助。

購(gòu)買(mǎi)之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,，為何會(huì)發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形,？

研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時(shí)出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少，大都是因?yàn)殡x心過(guò)程操作上的失誤,，造成細(xì)胞的物理性損傷,，以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,，應(yīng)待細(xì)胞生長(zhǎng)隔夜后再更換培養(yǎng)基即可,。

有必要做熱滅活嗎?

實(shí)驗(yàn)顯示，經(jīng)過(guò)正確處理的熱滅活血清,，對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過(guò)的血清對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)只有微小的促進(jìn)，或*沒(méi)有任何作用,，甚至通常因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量,，而造成細(xì)胞生長(zhǎng)速率的降低。而經(jīng)過(guò)熱處理的血清，沉淀物的形成會(huì)顯著的增多,，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,，像是“小黑點(diǎn)"，常常會(huì)讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37℃環(huán)境中,，又會(huì)使此沉淀物更增多，使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增,。

細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí),，是否應(yīng)馬上去除DMSO？ 

除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO敏感之細(xì)胞外,，絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）,，在解凍之后，應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中,，待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可,，如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無(wú)法生長(zhǎng)或貼附之問(wèn)題。

DMSO之等級(jí)和無(wú)菌過(guò)濾之方式為何,？

冷凍保存使用之DMSO等級(jí),，必須為T(mén)issue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)，其本身即為無(wú)菌狀況,，第一次開(kāi)瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中,，保存于4 C，避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì),，并可減少污染之機(jī)會(huì),。若要過(guò)濾DMSO，則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜,。

可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,？

不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基,，若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,，細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)，造成細(xì)胞無(wú)法存活,。

可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類(lèi),？

不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源,，所以血清的種類(lèi)和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響,。來(lái)自不同物種的血清，在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活,。

培養(yǎng)基中是否須添加抗生素,？

除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下,，培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素,。

細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？

動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5 - 10% DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 %原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之,。注意：由于DMSO 稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能,，故不可將DMSO直接加入細(xì)胞液中，必須使用前先行配制完成,。

細(xì)胞欲冷凍保存時(shí),，細(xì)胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細(xì)胞濃度？

冷凍管內(nèi)細(xì)胞數(shù)目一般為1x106 cells/ml vial,，融合瘤細(xì)胞則以5x106 cells/ml vial 為宜。

 L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)中重要嗎,？它在溶液中不穩(wěn)定嗎,？

L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是重要的。脫掉氨基后,，L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源,、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。L-谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解,，但是確切的降解率一直沒(méi)有最終定論,。L-谷氨酰胺的降解導(dǎo)致氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性,。

GlutaMAX-I是什么,？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用GlutaMAX-I？這個(gè)二肽有多穩(wěn)定,？ 

GlutaMAX-I 二肽是一個(gè)L-谷氨酰胺的衍生物,，其不穩(wěn)定的alpha-氨基用L-丙氨酸來(lái)保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽,，釋放L-谷氨酰胺供利用,。GlutaMAX-I二肽非常穩(wěn)定，即使在121磅滅菌20分鐘,，GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,，如果在相同條件下，L-谷氨酰胺幾乎*降解,。

血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理？

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,，但的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，而血纖維蛋白（形成凝血的蛋白之一）在血清解凍后,，也會(huì)存在于血清中，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心，上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾,。我們不建議您以過(guò)濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞您的過(guò)濾膜。

為什么要熱滅活血清? 

加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng),。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺,，激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞,。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細(xì)胞,，昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),，推薦使用熱滅活血清。

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