1對(duì)于一根常用的C18柱，拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù),？為什么要這樣做,？

　　答：新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過程,，除了用流動(dòng)相平衡外,，有時(shí)候還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡，特別是測(cè)定分子量比較高的多肽,，尤其重要,。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢,，平衡所需時(shí)間也相應(yīng)較長,。具體平衡方式也很簡(jiǎn)單，多進(jìn)幾次樣品,，直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定,，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測(cè)定。

　　如果要加快平衡時(shí)間,，把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大,，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針,。用待測(cè)物對(duì)新柱平衡,，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。

2測(cè)定多肽,，一般采用什么柱子,？流動(dòng)相是乙腈和水，還有微量的TFA,。特別是像類似三肽的短肽,，應(yīng)該怎么選擇柱子？

　　答：分子量不高的多肽一般選用常規(guī)C18柱就能測(cè)定,，也有用離子交換柱、水性C18柱和Hilic親水作用柱的,。

3氨基柱在進(jìn)酸性樣品時(shí),，很傷柱子，如使用一段時(shí)間后,，柱效降低,，峰形改變,，如何恢復(fù)？

　　答：氨基柱測(cè)酸性樣品,，應(yīng)該是用氨基柱的HILIC模式,。酸的存在可能會(huì)使略帶負(fù)電荷的氨基官能團(tuán)質(zhì)子化，導(dǎo)致使用一段時(shí)間后對(duì)于某些類的分析物保留性質(zhì)有所改變或表現(xiàn)在柱效下降,。建議：用5-10倍的柱體積的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液沖洗該柱(沖洗后當(dāng)然要再用不含堿的流動(dòng)相洗去多余氨),，之后再進(jìn)行分析這類酸性分析物時(shí)建議在流動(dòng)相中略微添加少許氨如0.1％。

4色譜柱的技術(shù)都有哪些,？比如封尾等,，這些技術(shù)在應(yīng)用時(shí)都體現(xiàn)在哪里？

　　答：色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù),，填料技術(shù)自不待言,，填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒有想象中的這么簡(jiǎn)單,，不同固定相,、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長度,，裝柱工藝都有所不同,，要裝出緊密、穩(wěn)定,、均一的柱床,，更多是一門藝術(shù)，需要經(jīng)驗(yàn)積累,。

　　國內(nèi)和國外想比,，我認(rèn)為色譜柱的差距在于：國內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開發(fā)填料，一般買國外現(xiàn)成填料裝柱,，買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里,。另外因?yàn)檠b柱歷史短，經(jīng)驗(yàn)積累少,，裝柱工藝也沒有*達(dá)到國外水平,。另外，對(duì)色譜柱性能很關(guān)鍵的基礎(chǔ)材料-----裸硅膠,，國產(chǎn)的還不過關(guān),，在純度、粒徑和孔徑的均一性方面和國外產(chǎn)品相比,，差距很大,。

5色譜柱技術(shù)的差距在哪里？

　　答：液相色譜柱裝填實(shí)際上是有一定技巧和程序,，可能還有一些運(yùn)氣,。一般使用高壓勻漿方法裝填,。也就是能讓填料在溶劑內(nèi)均勻地懸浮。然后用瞬間高壓壓實(shí),，這實(shí)際上用到了不同比例的勻漿液體,，和合適的壓力。壓力太大,，顆粒破碎,，壓力太小，塔板數(shù)少,。同時(shí)壓力需要穩(wěn)定,，不然分布不均，拖尾嚴(yán)重,。同時(shí)還有頭上平整程度,。套上套，就可以用了,。

6柱子在什么情況下可以清洗一下篩板呢,？原來也討論過這個(gè)問題，我也拆下來清洗過,，但我看到柱前段的污染更甚,，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的篩板安裝上去,。問題解決了,，但使用壽命會(huì)不會(huì)減少呢？

　　答：柱頭污染了,，就取出污染的,，再裝一些填料。因?yàn)榧尤肽愎瘟诵┨盍?，那么微觀的塔板數(shù)就少了,。假入你刮得不多，僅表面,，可能就是一些臟物,，所以，問題解決,。但是今后還會(huì)有同樣問題,，再掛，那么不小心刮,，影響柱效,。建議還是裝一個(gè)預(yù)柱。

7如果柱子取下來放置一段時(shí)間,，需要做什么保護(hù)嗎,？

　　答：對(duì)一般的反相柱，也就是洗干凈后放到純甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,，然后用堵頭塞緊柱兩頭,，以免保存溶劑揮發(fā)，應(yīng)該不需要做特殊的保護(hù),。

8流動(dòng)相中加入適量的四氫（防和諧）呋喃可以改善峰形的機(jī)理是什么,？

　　答：《液相色譜方法及應(yīng)用》于世林編著的上面說：甲醇為質(zhì)子給予體、乙腈為質(zhì)子接受體,、四氫（防和諧）呋喃是偶極溶劑,，應(yīng)該除了極性影響，還有另外的影響因素,，至于分離機(jī)理,，還是比較復(fù)雜的，不能看成是個(gè)方法,。

9關(guān)于色譜柱的填裝問題,。我個(gè)人認(rèn)為現(xiàn)在色譜柱的填裝一般有3種情況：

　　(1)國外生產(chǎn)填料并填裝完成成品賣到國內(nèi)；

　　(2)國外生產(chǎn)填料,，國內(nèi)填裝銷售,；

　　(3)國內(nèi)生產(chǎn)填料，國內(nèi)填裝銷售,。

　　一般情況下,，第1種情況賣的貴，但質(zhì)量好,！可是如果是填料的生產(chǎn)很復(fù)雜的話,，那么填裝上國內(nèi)也跟不上去嗎？為什么換在國內(nèi)填裝就會(huì)出現(xiàn)或多或少的一些小問題呢,？

　　答：國內(nèi)填裝會(huì)出現(xiàn)質(zhì)量小問題,，和國內(nèi)目前普遍做事沒有國外嚴(yán)謹(jǐn)有關(guān)吧。如果工藝技術(shù)上沒有問題,，又能制訂并切實(shí)執(zhí)行一整套嚴(yán)格的生產(chǎn)質(zhì)量管理措施,，國內(nèi)填裝和國外填裝并無區(qū)別。

10國產(chǎn)色譜柱在市場(chǎng)上占有比例如何??？

　　國內(nèi)色譜柱市場(chǎng)還沒有人進(jìn)行過科學(xué)統(tǒng)計(jì)，連一年色譜柱銷售總量也眾說紛云,，更別說國內(nèi)生產(chǎn)色譜柱所占份額了,。我估計(jì)是占30%左右吧。

11預(yù)柱或保護(hù)柱用還是不用的問題！原來分析中藥品種時(shí),，我一直都是用保護(hù)柱,。但來到新公司后，發(fā)現(xiàn)大家都沒有使用,，幾個(gè)實(shí)驗(yàn)室連保護(hù)柱都沒找到一個(gè),，也就是說大家從來都沒有用過。后來問一個(gè)老員工,，說是有可能影響藥品分析,。想問：安裝保護(hù)柱后會(huì)影響樣品分析嗎？我們做的大多是頭孢類的抗生素,。

　　答：應(yīng)該這樣說,，加上保護(hù)柱，肯定有利于保護(hù)色譜柱不受一些顆粒物質(zhì)的堵塞,，肯定有害于分離度和柱效,，因?yàn)楸Ｗo(hù)柱中間有著死體積的存在。但是如果保護(hù)柱接得好,，并且盡量控制其匹配性和經(jīng)常更換,，分離度和柱效應(yīng)該影響并不大。頭孢類的抗生素也要看到底是原料藥還是制劑嘍,，有些原料藥,，可以根據(jù)色譜柱的損耗選擇添加預(yù)柱(中間是個(gè)篩板)，制劑的話,，如果有輔料嚴(yán)重干擾或者流動(dòng)相鹽分比較大,，那還是配個(gè)保護(hù)柱比較好。

12用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水經(jīng)常出現(xiàn)?；蜻M(jìn)氣泡這是什么原因,？

　　答：水/甲醇比例在55：45時(shí)，黏度和柱壓有個(gè)極大值,。50：50接近了這個(gè)極值,，柱壓是比較高的，但影響柱壓大的還是填料粒徑和色譜柱內(nèi)徑,，你這個(gè)實(shí)例中不知用的什么規(guī)格的色譜柱,？系統(tǒng)壓力高，可能會(huì)因溶劑泵中的過濾頭供液速度跟不上而導(dǎo)致氣泡進(jìn)入系統(tǒng),，停機(jī)也應(yīng)該是因?yàn)闅馀葸M(jìn)入壓力下降的原因,，可考慮更換液體通量更大的過濾頭。

13資料顯示：在正常條件下,，填料粒度＞20µm時(shí),，干法填充制備柱較為合適,；顆粒＜20µm時(shí)，濕法填充較為理想,。各種填充方法有什么區(qū)別,？

答：填充方法一般有4種

　　①高壓勻漿法,，多用于分析柱和小規(guī)模制備柱的填充,；

　?、趶较蚣訅悍?，Waters專（防和諧）利；

　?、圯S向加壓法,，主要用于裝填大直徑柱；

　?、芨煞?。柱填充的技術(shù)性很強(qiáng)，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室使用已填充好的商品柱,。為什么以20um為分界點(diǎn),？填料方法的前三種都是濕法嗎，能不能對(duì)四種填充方法做一個(gè)簡(jiǎn)短的說明,？

14想請(qǐng)您具體說明一下反沖色譜柱的方法,，是不連檢測(cè)器嗎？

　　答：反沖就是將柱子反向連到系統(tǒng)中,。因?yàn)橛形廴疚锓礇_出來,，當(dāng)然不連檢測(cè)器，出液端直接接到廢液瓶就可以,。

15網(wǎng)上對(duì)柱子是否可以反沖一直有爭(zhēng)論,，那什么樣的柱子可以反沖，什么不可以,。反沖后是正者用,，還是反著用。具體到各型號(hào)柱子不僅是ODS柱,，其他如正向柱,、氨基柱、離子交換柱等都有解釋,。

　　答：一般的正相反相柱應(yīng)該都能反沖,，只有兩端篩板孔徑不對(duì)稱的柱子不能反沖，不過目前這樣的柱子已經(jīng)比較少見了,。反沖是為了把柱頭的污染物沖洗掉,，反沖后還是正著用比較好，以免柱子的兩頭都被污染。我們一直提倡的是：正向使用,，反向沖洗,。

16在做方法開發(fā)的時(shí)候,用乙腈和水作為流動(dòng)相,在調(diào)整梯度的時(shí)候發(fā)現(xiàn)，剛開始用60%乙腈,，RT為2.5分鐘,，調(diào)到40%乙腈，RT沒有變化,，30%也沒有變化,一直調(diào)到20%的時(shí)候,，RT突然變到了約13分鐘，請(qǐng)問這是什么原因,？我用的是離子交換柱,。

　　答：離子交換柱的保留時(shí)間主要由洗脫液的離子強(qiáng)度和pH決定，你現(xiàn)在講的比較簡(jiǎn)單,，需要把你的方法說的詳細(xì)一點(diǎn)才能做具體的分析,。譬如分析物是什么情況，其含有極性電離基團(tuán)和非極性基團(tuán)是什么性質(zhì),？離子交換柱是聚合物基質(zhì)還是硅膠基質(zhì),？水相是什么緩沖鹽？