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Cy3-SE, Cy3-NHS ester的使用方法
閱讀：1747 發(fā)布時間：2018-7-29| 提 供 商 | 陜西新研博美生物科技有限公司 | 資料大小 | 112.5KB |
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產(chǎn)品描述
Cyanine3（Cy3）,，是花青素?zé)晒馑厝玖霞易宓某蓡T之一,，是化學(xué)合成的聚甲炔染料。目前Cyanine系列染料以兩種異構(gòu)體的形式供貨,，一種是非磺化花青素（non-sulfonated cyanines）,，一種是磺化花青素（sulfonated cyanine）。兩者的光譜性質(zhì)幾乎一致,，因此大部分應(yīng)用可相互替換,，比如，都可用于標(biāo)記DNA或蛋白等生物分子,。兩者的主要區(qū)別在于：磺化染料是水溶性的,，在水相的標(biāo)記反應(yīng)體系內(nèi)不需要使用有機共溶劑，并且降低染料在水中聚集的可能性,，增強標(biāo)記效率,。
本Cyanine 3（Cy3）是以磺化染料的形式供貨，易溶于水,，Ex=555 nm,，Em=565 nm，具有明亮熒光,，光穩(wěn)定性強,，pH非敏感性等優(yōu)點，適用于標(biāo)記多肽,、蛋白以及核酸等生物分子,，以通過后續(xù)熒光成像以及其他熒光生物學(xué)方法分析目的蛋白。
本Cy3 NHS ester,，即含N-羥基琥珀酰亞胺（N-Hydroxysuccinimide）活化基團的Cy3,，可直接與生化分子上的氨基（-NH2）反應(yīng)形成穩(wěn)定的酰胺鍵，主要是伯胺,。
產(chǎn)品簡介：
英文別名（English Synonym） | Cyanine 3, monosuccinimidyl ester |
分子量（Molecular Weight） | 829.03 |
外觀（Appearance） | 紫色固體 |
Ex/Em | 555nm/565nm |
溶解性（Solubility） | 溶于DMSO,，DMF，水 |
結(jié)構(gòu)式（Structure） | |
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司
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運輸和保存方法
冰袋運輸,。-20℃干燥避光保存,，有效期1年。
注意事項
1）NHS ester基團對濕度非常敏感，務(wù)必干燥保存產(chǎn)品,。使用前產(chǎn)品需放到室溫回溫至少20min,。
2）NHS ester基團的水解發(fā)生在水溶性緩沖體系屬于競爭性反應(yīng)。對蛋白/多肽（濃度：1-1mg/ml）伯胺的連接反應(yīng)建議在pH 7-9范圍內(nèi)進行,。使用不含氨基的緩沖體系,，pH 7-9。比如100 mM 磷酸鈉,，150 mM 氯化鈉,， pH 7.5； 100mM Hepes, pH 7.5,。100 mM 碳酸鈉/碳酸氫鈉, pH 8-9,；或100mM 硼酸緩沖液, pH 8-9。
3）不要使用含伯胺的任何緩沖液,，比如Tris,，甘氨酸。
4）為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。
使用方法（用Cy3-NHS Ester 標(biāo)記抗體）
【注意】：可參考本方法進行多肽，蛋白或者其他分子的標(biāo)記,，需要根據(jù)具體的實驗體系對合適的標(biāo)記緩沖體系,，樣本濃度，染料濃度等參數(shù)做出合適的調(diào)整,。
1）用不含氨基的合適的緩沖液（eg.100mM磷酸鈉,，150mM NaCl, pH7.5）溶解抗體使其濃度達到1-5mg/ml?！?strong>注】：如抗體中有殘留Tris或 glycine 污染,，則需透析或者脫鹽到合適的緩沖液內(nèi)。
2）使用前,，用適量去離子水或者無水DMSO溶解Cy3-NHS,，使其摩爾濃度為抗體摩爾濃度的400倍，例如,，待標(biāo)記的IgG濃度為1mg/ml（eg 6.7?M）,，則溶解后Cy3-NHS的濃度為2.7mM；如待標(biāo)記的IgG濃度為2.5mg/ml,，則溶解后Cy3-NHS的濃度為6.75mM,；
3）向抗體中加入適量Cy3-NHS試劑，以達到預(yù)期的標(biāo)記效率,?！?strong>注】：當(dāng)用Cy 3 NHS ester標(biāo)記抗體或其他蛋白,，亮度的偶聯(lián)物其染料/蛋白的比率為4-12，取決于特定的應(yīng)用,。過高比率會增加非特異性背景,，喪失抗體特異性結(jié)合，導(dǎo)致聚集,。建議根據(jù)應(yīng)用優(yōu)化標(biāo)記比率。
4）室溫孵育60min（或更長）,；
5）利用合適緩沖液透析或脫鹽柱去除未反應(yīng)的試劑,；
6）分別在280nm和550nm檢測Cy3-抗體的吸光值；
7）測定Cy3標(biāo)記效率（DOL）和標(biāo)記濃度,。見下公式,。
公式一. 利用下面公式計算Cy3標(biāo)記效率（DOL）及其濃度（mg/ml） |
Eq.1 Number of Cy3 dye per protein=molarity Cy3 dye / molarity protein |
Eq.2 [Molarity of Cy3 dye]=A555/ε555 |
Eq.3 [Molarity of protein]=A280C/ε280 |
Eq.4 mg/ml=[A280-(A555×0.08)/(E1%/10)]×dilution factor |
【注】上述參數(shù)如下： A555=conjugate absorbance at 555±2nm ε555=molarextinction coefficient Cys dye =150000M-1cm-1 A280= conjugate absorbance at 280nm A280C =corrected conjugate absorbance at 280nm= A280-( A555×0.08) ε280= molarextinction coefficient protein(M-1cm-1)=MWp×E1%/10 |
應(yīng)用舉例：
用高于抗體摩爾濃度20倍的Cy3-NHS標(biāo)記 0.1 ml山羊IgG（濃度為1mg/ml）。標(biāo)記后脫鹽去除未標(biāo)記染料,，在PBS中測定(1:5稀釋)測定其A280和A555:
A280=0.2906
A555=0.9825
另：山羊IgG分子量為150kDa, E1%=13.6 or 204000M-1cm-1
計算DOL如下：
By Equation 2 Molarity of Cy3 dye=0.9825/150000 M-1cm-1=6.55?M
By Equation 3 Molarity of IgG =0.2906-(0.9825×0.08)/204000 M-1cm-1=1.039?M
By Equation 1 number of Cy3 per IgG=6.55?M/1.039?M=6.3
則計算Cy3-IgG protein 濃度為（mg/ml）：
By Equation 4 mg/ml=[0.2906-(0.9825×0.08)/1.36]×5=0.78mg/ml
Cy3 NHS酯：
Cy3 NHS酯是標(biāo)記生物分子氨基的活性染料,，此試劑可標(biāo)記溶解蛋白，多肽和寡核苷酸/DNA,。對于比較敏感的蛋白請選擇無需任何共溶劑的,，可溶于水的磺酸基-Cy3 NHS酯。
分子結(jié)構(gòu)：
一般性質(zhì)：
外觀：紅色粉末
分子量：590.15
質(zhì)譜分析M+增量：474.2
分子式：C34H40ClN3O4
溶解性：溶于有機溶劑（DMF,DMSO,二氯甲烷）,，不溶于水
質(zhì)控：NMR 1H（95%）和13C,TLC,功能測試
光譜性質(zhì)：
激發(fā)波長：555nm
在激發(fā)波長下的消光系數(shù)：150000Lmol-1cm-1
發(fā)射波長：570nm
熒光量子產(chǎn)率：0.31
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司
Cy5 NHS酯：
Cy5在生命科學(xué)研究和診斷領(lǐng)域是非常常用的熒光團,。此熒光團在紅色區(qū)域有發(fā)射，許多CCD檢測器有靈敏度,。
Cy5 NHS酯是標(biāo)記多肽,，蛋白和寡核苷酸的活性染料,。染料需要少量的有機共溶劑（比如DMF和DMSO）溶解后進行標(biāo)記反應(yīng),。此試劑可以標(biāo)記溶解蛋白和各種多肽,，寡核苷酸的氨基,。對于易降解的蛋白,，不可使用DMF或DMSO,，應(yīng)選擇我們的不需任何共溶劑的sulfo-Cy5 NHS酯，兩者具有非常相似的熒光特性,。
分子結(jié)構(gòu)：
一般性質(zhì)：
外觀：暗藍色粉末
分子量：616.19
分子式：C36H42ClN3O4
溶解性：易溶于有機溶劑（DMF,DMSO和氯化物）,，難溶于水
質(zhì)控：NMR 1H（95%）和13C,TLC,，功能測試
光譜性質(zhì)：
激發(fā)波長：646nm
在激發(fā)波長下的消光系數(shù)：250000 mol-1cm-1
發(fā)射波長：662nm
熒光量子產(chǎn)率：0.2
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司
Cy 3.5 NHS酯：
Cy3.5 NHS酯是標(biāo)記多肽,，蛋白和寡核苷酸的活性染料
Cy3.5 NHS酯可替代Alexa Fluor 594,DyLight 594的NHS酯
分子結(jié)構(gòu)： 
一般性質(zhì)：
外觀：暗紫色粉末
分子量：732.35
分子式：C45H50ClN3O4
溶解性：溶于有機溶劑（DMF,DMSO,，二氯甲烷）,，不溶于水
質(zhì)控:NMR 1H（95%）和13C,TLC，功能測試
光譜性質(zhì)：
激發(fā)波長：591nm
在激發(fā)波長下的消光系數(shù)：116000Lmol-1cm-1
熒光量子產(chǎn)率：0.35
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司
Cy 5.5 NHS酯：
Cy5.5 NHS酯標(biāo)記多肽，蛋白和寡核苷酸的氨基
Cy5.5 NHS ester：是近紅外染料,，除了用于標(biāo)記多肽,，蛋白和寡核苷酸氨基的活性染料,，可用于后續(xù)的小動物活體成像實驗,。
染料可代替Alexa Fluor 680 NHS ester和DyLight 680 NHS ester
分子結(jié)構(gòu)： 
一般性質(zhì)：
外觀：深藍色粉末
分子量：716.31
分子式：C44H46ClN3O4
溶解性：溶于有機溶劑（DMSO,DMF,二氯甲烷）,，在水中不易溶解
質(zhì)控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能測試
光譜性質(zhì)：
激發(fā)波長：673nm
在激發(fā)波長下的消光系數(shù)：209000Lmol-1cm-1
發(fā)射波長：707nm
熒光量子產(chǎn)率：0.2
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司
ROX NHS酯,，純6-異構(gòu)體：
ROX（羅丹明X又叫R101）是具有多種用途的高熒光性，不感光的羅丹明染料,。ROX標(biāo)記的寡核苷酸探針經(jīng)常被用于qPCR及具有ROX通道的qPCR設(shè)備(http://www.chemdrug,。。ｃｏｍ/sell/22/)
標(biāo)記多肽,，蛋白和氨基-寡核苷酸的活性染料,，此染料可代替Alexa Fluor 568
分子結(jié)構(gòu)：
一般性質(zhì)：
外觀：深紅色粉末
分子量：631.67
質(zhì)譜分析M+增量：516.2
分子式：C37H33N3O7
CAS號：117491-83-5
溶解性：易溶于有機溶劑（DMF,DMSO）,，略溶于水
質(zhì)控：NMR 1H（95%）和13C,TLC,功能測試
光譜性質(zhì)：
激發(fā)波長：570nm
激發(fā)波長下的消光系數(shù)：82000Lmol-1cm-1
發(fā)射波長：591nm
熒光量子產(chǎn)率：1.0
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司
Cy7 NHS 酯：
氨基活性Cy7,近紅外染料,。此試劑可被用于產(chǎn)生Cy7-標(biāo)記的生物分子,，用于后續(xù)的小動物活體成像研究,，藥物(http://www.chemdrug,。,。ｃｏｍ/)設(shè)計及相關(guān)實驗,。Cy7中心加強聚亞甲基鏈的結(jié)構(gòu)特點，與母結(jié)構(gòu)相比其量子產(chǎn)率提高了20%,，增加了其熒光亮度,。
分子結(jié)構(gòu)：
一般性質(zhì)：
外觀：綠色粉末
分子量：682.29
分子式：C41H48ClN3O4
溶解性：溶于有機溶劑（DMSO,DMF,二氯甲烷），不易溶于水
質(zhì)控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能測試
光譜性質(zhì)：
激發(fā)波長：750nm
在激發(fā)波長下的消光系數(shù)：199000Lmol-1cm-1
發(fā)射波長：773nm
熒光量子產(chǎn)率：0.3
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司
Cy7.5 NHS 酯：
Cy7.5是近紅外染料,，具有長的發(fā)射波長,，近紅外照射容易穿透組織，可用于小動物活體成像實驗,。Cy7.5中心加強聚亞甲基鏈的結(jié)構(gòu)特點,，與母結(jié)構(gòu)相比其量子產(chǎn)率提高了20%，增加了其熒光亮度,。
分子結(jié)構(gòu)：
一般性質(zhì)：
外觀：綠色粉末
分子量：782.41
分子式：C49H52ClN3O4
溶解性：溶于有機溶劑（DMSO,DMF,二氯甲烷）,，不易溶于水
質(zhì)控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能測試
光譜性質(zhì)：
激發(fā)波長：788nm
在激發(fā)波長下的消光系數(shù)：223000Lmol-1cm-1
發(fā)射波長：808nm
熒光量子產(chǎn)率：0.3
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司
Sulfo-Cy3 NHS酯：
此染料可溶于水，氨基活性Cy3染料,。在水溶液中有效標(biāo)記蛋白和多肽,，無需共溶劑，是低溶解性蛋白和易于降解蛋白的理想選擇,。
此染料是磺化,，親水性染料?？梢源鍭lexa Fluor 546和DyLight 549
分子結(jié)構(gòu)：
一般性質(zhì)：
外觀：深紅色晶體
分子量：735.8
分子式：C34H38N3NaO10S2
溶解性：極易溶于水,，易溶于有機溶劑（DMF,DMSO）
質(zhì)控：NMR 1H（95%）和13C,TLC，功能性測試
光譜性質(zhì)：
激發(fā)波長：548nm
激發(fā)波長下的消光系數(shù)：162000Lmol-1cm-1
發(fā)射波長：563nm
熒光量子產(chǎn)率：0.1
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司
Sulfo-Cy5 NHS酯：
水溶性Cy5 NHS酯,，用于標(biāo)記生物分子的氨基,，無需任何共溶劑，因此可以用于標(biāo)記在有機溶劑中易降解的蛋白和溶解性低的蛋白
Cy5 是***常用的熒光團之一，與多種設(shè)備兼容,，比如平板讀數(shù)儀,，顯微鏡和成像儀
此染料是高水溶性，可以代替多種用途的Alexa Fluor 647,DyLight 649
分子結(jié)構(gòu)：
一般性質(zhì)：
外觀：深藍色粉末
分子量：761,84
分子式：C36H40N3NaO10S2
溶解性：極易溶于水,，易溶于有機溶劑DMF和DMSO
質(zhì)量控制：NMR 1H （95%）和13C,TLC,功能性測試
光譜性質(zhì)：
激發(fā)波長：646nm
激發(fā)波長下的消光系數(shù)：271000Lmol-1cm-1
發(fā)射波長：662nm
熒光量子產(chǎn)率：0.2
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司
Sulfo-Cy7 NHS ester：
一般性質(zhì)：
外觀：深綠色粉末
分子量：827.94
分子式：C41H46N3NaO10S2
溶解性：易溶于水,DMF,DMSO
質(zhì)控：NMR 1H(95%)13C,TLC,功能測試
光譜性質(zhì)：
激發(fā)波長：740nm
在激發(fā)波長下的消光系數(shù)：240600Lmol-1cm-1
發(fā)射波長：773nm
供應(yīng)商：陜西新研博美生物科技有限公司