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中級(jí)會(huì)員 | 第8年

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蛋白質(zhì)分離純化抽提與蛋白質(zhì)粗制品的獲得

時(shí)間：2022/4/21閱讀：1146
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蛋白質(zhì)分離純化抽提： 
通常選擇適當(dāng)?shù)木彌_液溶劑把蛋白質(zhì)提取出來(lái),。抽提所用緩沖液的 pH,、離子強(qiáng)度、組成成分等條件的選擇應(yīng)根據(jù)欲制備的蛋白質(zhì)的性質(zhì)而定,。如膜蛋白的抽提,，抽提緩沖液中一般要加入表面活性劑(十二烷基磺酸鈉、tritonX-100 等),，使膜結(jié)構(gòu)破壞,，利于蛋白質(zhì)與膜分離。在抽提過(guò)程中,，應(yīng)注意溫度,，避免劇烈攪拌等，以防止蛋白質(zhì)的變性,。
蛋白質(zhì)粗制品的獲得：
選用適當(dāng)?shù)姆椒▽⑺牡鞍踪|(zhì)與其它雜蛋白分離開(kāi)來(lái),。比較方便的有效方法是根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度的差異進(jìn)行的分離,。
常用的有下列幾種方法：
1.等電點(diǎn)沉淀法
不同蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不同，可用等電點(diǎn)沉淀法使它們相互分離,。
2.鹽析法
不同蛋白質(zhì)鹽析所需要的鹽飽和度不同,，所以可通過(guò)調(diào)節(jié)鹽濃度將目的蛋白沉淀析出。被鹽析沉淀下來(lái)的蛋白質(zhì)仍保持其天然性質(zhì),，并能再度溶解而不變性,。
3.有機(jī)溶劑沉淀法
中性有機(jī)溶劑如乙醇、丙酮,，它們的介電常數(shù)比水低,。能使大多數(shù)球狀蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解度降低，進(jìn)而從溶液中沉淀出來(lái),，因此可用來(lái)沉淀蛋白質(zhì),。此外，有機(jī)溶劑會(huì)破壞蛋白質(zhì)表面的水化層,，促使蛋白質(zhì)分子變得不穩(wěn)定而析出,。由于有機(jī)溶劑會(huì)使蛋白質(zhì)變性，使用該法時(shí),，要注意在低溫下操作,，選擇合適的有機(jī)溶劑濃度。

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