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中級(jí)會(huì)員 | 第8年

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全自動(dòng)組織研磨機(jī)研磨破碎酵母細(xì)胞

時(shí)間:2019/1/3閱讀:1811
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多年來(lái),酵母菌在生物化學(xué),、遺傳和分子分析等方面取得了大量的研究成果,,已成為生物制藥研究者的模型生物系統(tǒng)和工具。因此,,酵母已成為基因表達(dá)研究和重組蛋白的常用載體,。盡管研究中使用的酵母種類很多,,包括Pichia、Hansen和Debali酵母,,但酵母是常用的,。

傳統(tǒng)的酶法很難從細(xì)胞中提取完整的酵母RNA和細(xì)胞內(nèi)蛋白。溶菌酶通常是粗制濫造的,,含有RNA酶和蛋白酶,,不僅破壞細(xì)胞壁,而且破壞靶分子,。此外,,原生質(zhì)體的酶解通常需要添加洗滌劑,這會(huì)導(dǎo)致各種蛋白質(zhì)的失活,。因此,,機(jī)械裂解或破壞酵母細(xì)胞通常需要釋放小分子。

1,、粉碎前的準(zhǔn)備:

0.1g細(xì)菌(本實(shí)驗(yàn)以0.1g菌體為例),;XX鋼珠;研磨機(jī)(選用品牌新銳精儀Gd-300),;XX研磨罐,。

2、磨削加工,。

將0.1g細(xì)菌與30MLPBS溶液混合,,用移液管均勻滴入液氮。收集冷凍的球,。頻率調(diào)整到XXHz,,振動(dòng)時(shí)間為XXS。取出研磨罐,,放入液氮預(yù)冷XXS,,取出再研磨。

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