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蛋白純化提取的方式你知道有哪些嗎
蛋白質(zhì)的分離純化是生物化學(xué)技術(shù)中的重要內(nèi)容,，在科研和生產(chǎn)中都有重要作用,。蛋白質(zhì)純化的流程大致包括選材及預(yù)處理、細(xì)胞破碎及抽提、初步提取和精制純化等部分,，根據(jù)具體的純化目的和要求可以有所不同,。
蛋白提取純化方法
01蛋白質(zhì)(包括酶)的提取
大部分蛋白質(zhì)都可溶于水、稀鹽,、稀酸或堿溶液,，少數(shù)與脂類結(jié)合的蛋白質(zhì)則溶于乙醇、丙酮,、丁醇等有機(jī)溶劑中,，因些，可采用不同溶劑提取分離和純化蛋白質(zhì)及酶,。
(1)水溶液提取法
稀鹽和緩沖系統(tǒng)的水溶液對蛋白質(zhì)穩(wěn)定性好,、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)常用的溶劑,，通常用量是原材料體積的1-5倍,，提取時需要均勻的攪拌，以利于蛋白質(zhì)的溶解,。提取的溫度要視有效成份性質(zhì)而定。
一方面,，多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解度隨著溫度的升高而增大,，因此，溫度高利于溶解,，縮短提取時間,。
但另一方面，溫度升高會使蛋白質(zhì)變性失活,，因此,，基于這一點考慮提取蛋白質(zhì)和酶時一般采用低溫(5度以下)操作。為了避免蛋白質(zhì)提取過程中的降解,，可加入蛋白水解酶抑制劑(如二異丙基氟磷酸,，碘乙酸等)。
下面著重討論提取液的pH值和鹽濃度的選擇：
a.pH值
蛋白質(zhì),，酶是具有等電點的兩性電解質(zhì),，提取液的pH值應(yīng)選擇在偏離等電點兩側(cè)的pH 范圍內(nèi)。用稀酸或稀堿提取時,，應(yīng)防止過酸或過堿而引起蛋白質(zhì)可解離基團(tuán)發(fā)生變化,，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)構(gòu)象的不可逆變化，一般來說,，堿性蛋白質(zhì)用偏酸性的提取液提取,，而酸性蛋白質(zhì)用偏堿性的提取液。
b.鹽濃度
稀濃度可促進(jìn)蛋白質(zhì)的溶，稱為鹽溶作用,。同時稀鹽溶液因鹽離子與蛋白質(zhì)部分結(jié)合,，具有保護(hù)蛋白質(zhì)不易變性的優(yōu)點，因此在提取液中加入少量NaCl等中性鹽,，一般以0.15摩爾,。升濃度為宜。緩沖液常采用0.02-0.05M磷酸鹽和碳酸鹽等滲鹽溶液,。
(2)有機(jī)溶劑提取法
一些和脂質(zhì)結(jié)合比較牢固或分子中非極性側(cè)鏈較多的蛋白質(zhì)和酶,，不溶于水、稀鹽溶液,、稀酸或稀堿中,，可用乙醇、丙酮和丁醇等有機(jī)溶劑,，它們具的一定的親水性,，還有較強(qiáng)的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液,。但必須在低溫下操作,。
丁醇提取法對提取一些與脂質(zhì)結(jié)合緊密的蛋白質(zhì)和酶特別*，一是因為丁醇親脂性強(qiáng),，特別是溶解磷脂的能力強(qiáng),；二是丁醇兼具親水性，在溶解度范圍內(nèi)(度為10%,，40度為6.6%)不會引起酶的變性失活,。另外，丁醇提取法的pH及溫度選擇范圍較廣,，也適用于動植物及微生物材料,。
02蛋白質(zhì)的分離純化
根據(jù)蛋白質(zhì)溶解度不同的分離方法
蛋白質(zhì)的鹽析
中性鹽對蛋白質(zhì)的溶解度有顯著影響，一般在低鹽濃度下隨著鹽濃度升高,，蛋白質(zhì)的溶解度增加,，此稱鹽溶；當(dāng)鹽濃度繼續(xù)升高時,，蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出,，這種現(xiàn)象稱鹽析，將大量鹽加到蛋白質(zhì)溶液中,，高濃度的鹽離子(如硫酸銨的SO4和NH4)有很強(qiáng)的水化力,，可奪取蛋白質(zhì)分子的水化層，使之“失水”,，于是蛋白質(zhì)膠粒凝結(jié)并沉淀析出,。
鹽析時若溶液pH在蛋白質(zhì)等電點則效果更好,。由于各種蛋白質(zhì)分子顆粒大小、親水程度不同,，故鹽析所需的鹽濃度也不一樣,，因此調(diào)節(jié)混合蛋白質(zhì)溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質(zhì)分段沉淀。