制備型加壓液相色譜，按照色譜柱和樣品量的大小,，分為：(1)低壓液相色譜,；(2)中壓液相色譜；(3)高壓液相色譜,；(4)快速色譜,。低壓、中壓與高壓液相色譜的壓力范圍之間會存在一定交疊,，沒有統(tǒng)一,、明確的標(biāo)準(zhǔn)。

　　1快速色譜

　　柱壓通常為2bar(或30psi)左右,，對于那些容易分離的簡單混合物,，快速色譜具有操作簡便,、經(jīng)濟等優(yōu)點。但快速色譜不同于一般的層析分離,，這種分離沒有壓力,，而快速分離通常使用瓶裝氮氣加壓,，使流動相具有一定的流速,，從而縮短了分離時間。

　　快速色譜使用的柱子一般是玻璃柱,，柱直徑為3～10cm.長度為7～15cm,。快速色譜中使用*泛的固定相為硅膠,。采用的粒徑通常為：25～40μm,，40～63μm或63～200μm的球形固定相。其它如鍵合相,、氧化鋁,、聚酰胺吸附劑也常用作快速色譜的固定相使用。

　　2低壓色譜(LPLC)

　　柱壓一般低于5bar(或75psi),。

　　低壓色譜一般是由蠕動泵,、進樣閥和檢測器組成，可以連續(xù)化,，實現(xiàn)自動的梯度淋洗和餾分收集等操作,。色譜柱管一般是玻璃或聚合物材料的，長度一般為240-440mm,，內(nèi)徑為10-40mm,。

　　對于大多數(shù)在紫外區(qū)有吸收的物質(zhì)，光學(xué)檢測器很常用,。填料一般使用軟質(zhì)的葡聚糖,、瓊脂糖、纖維素,、合成高聚物或離子交換劑,，粒徑一般為40-60μm。

　　3中壓液相色譜(MPLC)

　　柱壓在5-20bar(或75-300psi)之間,，廣泛用于實驗室和工業(yè)規(guī)模的生物制品(如動物臟器提取液,、濃縮液、體液,、植物提取液,、生物技術(shù)發(fā)酵液等--往往需要經(jīng)過濾膜作初級凈化)的處理，以提取或純化所需的產(chǎn)品,。

　　中壓液相制備色譜的主要部件為輸液泵,、進樣閥,、檢測器、餾分收集器等,，比如瑞士公司的早期的中壓液相制備色譜,，其輸液泵最大流速可達(dá)156mL/min，并配有阻尼器,，以保證液流的穩(wěn)定,；進樣器配有0.5-50mL的不同體積的定量管；檢測器有紫外和示差折光檢測器,，流通池體積比較大,，允許大流量流動相通過而無需分流；餾分收集器有原盤式和排式兩種,，原盤式的接收管最多達(dá)80個,，而后者則更多；色譜柱內(nèi)徑9-105mm,，長度250-1760mm不等,。

　　對于一般中壓制備色譜，當(dāng)色譜柱直徑較大時,，柱頭往往設(shè)計成錐形或有類似于傘狀的液流導(dǎo)向結(jié)構(gòu),，使得當(dāng)大量樣品進入到柱頭上時，能迅速地分散到整個柱橫截面上,，及時被流動相沖走,，避免了因樣品的局部過濃而引起柱超負(fù)荷和譜帶加寬。柱子填料則采用比較耐壓的交聯(lián)改性的多糖凝膠(如Sepharose CL,，Superose等),，聚合物微球，復(fù)合材料介質(zhì)或硬質(zhì)SiO2基體的化學(xué)鍵合相等,，粒徑一般在25～40μm(常用的填料尺寸是15-25μm,，25-40μm或40-63μm)，可采用濕法或干法裝柱,。

　　4高壓液相色譜(HPLC)

　　是指柱壓一般大于20bar(或300psi)的“高壓(或高效)液相色譜”,，通常指所用色譜柱的塔板數(shù)大于2000，一般是在2,，000～20,，000的范圍之間。

　　當(dāng)需要從大量的物質(zhì)中分離純化不足1%的所需成分時,，分離工作將會十分困難,，往往在純化的最后階段需要使用10μm或更小顆粒的高效填料。為獲得所需微量組分,，可采用如下分離手段：制備型分離→半制備型分離→分析型分離→產(chǎn)物,。為提高每次分離獲得純品的數(shù)量,，制備型高壓液相色譜分離通常在超載情況下運行。

　　高壓液相色譜,，即目前常用的高效液相色譜,。色譜柱內(nèi)填裝的是粒度范圍較窄的微小顆粒固定相(3～30μm)，為使流動相流出,，需采用較高的壓力,，同時系統(tǒng)的復(fù)雜性及成本亦增大，但分辨率可得到較大的提高,。而填裝較大顆粒的固定相時,，如中壓液相色譜系統(tǒng),，裝柱較容易,，柱的通透性較高(只需較低的泵壓力)，可采用更大的色譜柱和更經(jīng)濟的儀器,，由此分辨率也較低,。

　　5用分析型高壓液相色譜進行制備型分離

　　當(dāng)所需純化合物的量很少時(微克級至幾毫克)，可用分析型色譜柱進行多次分離,。效果和利用大直徑色譜柱進行一次性分離相同,。采用小直徑色譜柱時，可利用已有的分析型儀器,，而無需在色譜柱,、填料及附件方面投入更大資金；另外,，還可在很大程度上避免由于放大所產(chǎn)生的問題,，使分離速度加快。

　　小直徑色譜柱的尺寸一般為250×4.6mm,，通常裝有反相填料,，每次可進樣5～100ug，通過多次進樣分離,，可獲得足夠的純品,。例如，Suzuki等(1994)報道從豆科植物羽扇豆(Lupinus Hirsutus)中分離一羽扇豆生物堿糖苷時,，其最后的分離步驟采用LiChrosorb Si60,，5μm，250×4.6mm色譜柱進行高壓液相色譜分離,，洗脫劑為含25%甲醇的yi醚溶液-5%氨水50:1,。

　　經(jīng)常需用分析型色譜柱進行分離的一個領(lǐng)域是對肽類化合物的純化。生物活性肽的含量通常很低,，用分析型高壓液相色譜作為最后的純化手段時,，不會使色譜柱超載,。

　　為了提高分離效率，可將分析型高壓液相色譜柱連接起來使用,。此時可采用顆粒度在20～30μm的填料,，以保持適當(dāng)?shù)耐ㄍ感裕绕涫钱?dāng)使用含水溶劑時,。當(dāng)使用己烷等有機溶劑時,，由于流動相的粘度較低，可使用顆粒度為10μm的填料,。

　　然而由于分析型色譜系統(tǒng)無法提供大規(guī)模制備型分離所需的流速,，其應(yīng)用受到一定限制。