【產品名稱】莫氏立克次體（RM）PCR試劑盒

【包裝規(guī)格】 50T/盒

【產品方法】實時熒光PCR法

【預期用途】

適用于檢測,，可用于臨床莫氏立克次體（RM）感染的輔助診斷,，但不作確診使用。

莫氏立克次體（RM）PCR試劑盒【檢驗原理】

本試劑盒采用TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術,，設計一對莫氏立克次體（RM）特異性引物，結合一條特異性探針，利用相應儀器對PCR 過程進行實時監(jiān)測,，實現(xiàn)檢測結果的定性分析,，用于臨床上對可疑感染者的病原 學診斷。

【主要組成成份】

反應液,、酶液,、陽性質控品、陰性質控品,。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,，避光保存、運輸,、反復凍融次數(shù)不超過 5 次,，有效期 12 個月。

【適用儀器】
ABI ,、安捷倫 MX3000P/3005P,、LightCycler、Bio-Rad,、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀,。

【保存和運輸】上述標本短期內可保存于-20℃，長期保存可置-70℃,，但不能超過 6 個月,，標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸， 嚴禁反復凍融,。

【使用方法】 

1 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1樣本前處理 

血液,、體液和棉拭子樣本取100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用核酸提qu或純化試劑（磁珠法或離心柱法）進行核酸提qu,，請按照試劑說明書進行操作,。

2. 試劑配制（試劑準備區(qū)） 

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設所需要的PCR 反應管管數(shù)為 N（N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照,；反應管 數(shù)每滿 10 份,，多配制 1 份），每測試反應體系配制如下表：

3.加樣（樣本處理區(qū)） 

將步驟1 提取的核酸、陽性質控品,、陰性質控品各取 4μL,，分別加入相應的反應管中，蓋好管蓋,，混勻,，短 暫離心,。

4.PCR 擴增（核酸擴增區(qū)）

4.1將待檢測反應管置于熒光定量PCR 儀反應槽內；

4.2設置好通道,、樣品信息,，反應體系設置為25μL； 熒光通道選擇： 檢測通道（Reporter Dye）FAM,， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE,，ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可,。

4.3推薦循環(huán)參數(shù)設置：

2.結果分析判定

2.1 結果分析條件設定設置Baseline 和 Threshold：一般直接按機器自動分析的結果分析,，當曲線出現(xiàn)整體傾斜時，根據(jù)分析后圖像 調節(jié) Baseline 的 start 值（一般可在 3~15 范圍內調節(jié)）,、stop 值（一般可在 5~20 范圍內調節(jié)）,，以及 Threshold 的 Value 值（上下拖動閾值線至高于陰性對照），重新分析結果,。

2.2 結果判斷陽性：檢測通道Ct 值≤35,，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線； 可疑：檢測通道 35值≤38,，建議重復檢測,，如果檢測通道仍為 35值≤38，且曲線有明顯的增長曲線,， 判定為陽性,，否則為陰性； 陰性：樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值,。

3.質控標準

 陰性質控品：Ct>38 或無 Ct 值顯示,； 陽性質控品：擴增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32,； 以上條件應同時滿足,，否則實驗視為無效。

4.檢測方法的局限性 

1.樣本檢測結果與樣本收集,、處理,、運送以及保存質量有關；

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,，會出現(xiàn)假陽性結果,；

3.陽性對照、擴增產物泄漏,，會導致假陽性結果,；

4.病原體在流行過程中基因突變、重組,，會導致假陰性結果,；

5.不同的提取方法存在提取效率差異,，會導致假陰性結果；

6.試劑運輸,，保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果,；
7.本檢測結果僅供參考,，如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行,；

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化,，完quan混勻并短暫離心；

3.反應液應避光保存,；

4.反應中盡量避免氣泡存在,，管蓋需蓋緊；

5.使用一次性吸頭,、一次性手套和各區(qū)專用工作服,；

6.樣本處理、試劑配制,、加樣需在不同區(qū)進行,，以免交叉污染；

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器,；

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待,，并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全通則》進行處理。
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