【產品名稱】豬瘟病毒野毒株PCR試劑盒

【包裝規(guī)格】 50T/盒

【產品方法】實時熒光PCR法

【預期用途】

適用于豬瘟病毒野毒株檢測,，可用于臨床豬瘟病毒野毒株感染的輔助診斷，但不作確診使用,。

豬瘟病毒野毒株PCR試劑盒【檢驗原理】

豬瘟病毒野毒株檢測試劑盒針對豬瘟病毒野毒株的高度保守區(qū)域設計特異性引物和探針,，在反應體系中含豬瘟病毒野毒株基因組模板的情況下，PCR反應得以進行并釋放熒光信號,。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道信號進行實時監(jiān)測和輸出,，實現檢測結果的定性分析。

【主要組成成份】

RT-PCR反應液,、混合酶液,、陽性對照、陰性對照,。

【儲存條件及有效期】

避光-20℃以下保存,，避免反復凍融，有效期為12個月,。

【適用儀器】
ABI 系列,、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 ,、Roche LightCycler R480,、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列,、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀,。

【檢驗方法】

試劑準備（試劑準備區(qū)）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體,。

（2）核算當次實驗所需要的反應數（n）,，并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數（1T）+陽性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數

（3）在無菌離心管中加入上述試劑,，充分混勻后瞬時離心,。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管,。

（4）蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管轉移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存,。

2.樣本準備（樣本處理區(qū)）

用QIAGEN,、Roche公司DNA提qu試劑盒提取DNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作,。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl,、終體積25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,，轉移到PCR儀器上,。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25μl/管,，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心,，轉移到PCR儀器上。

PCR（PCR擴增區(qū)）

（1）取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應管,，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置,，并記錄放置順序。

（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行PCR擴增,。

注：ABI系列熒光PCR儀在設置時不選ROX校正,，設置淬滅基團選擇None。

【參考值（參考范圍）】

1.試劑盒有效性判定：

（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35,。

（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值,，線形為直線或輕微斜線，無指數增長期,。

2.標本結果判定：

（1）陽性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數增長期,。

（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內。此時應對標本進行重復檢測,，如重復實驗結果Ct值仍在35～38范圍內,，有明顯指數增長期，則判定為陽性,，否則為陰性,。

（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無Ct值。

【檢驗方法的局限性】

當檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的di檢出限shi可能會發(fā)生假陰性的結果,。

本試劑盒僅供標本初步篩查使用,，對于本試劑盒檢測陽性結果應進一步使用培養(yǎng)法進行確診。

【注意事項】

使用本試劑盒的實驗室,，應嚴格按照國家有關部分頒布的有關基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理,；

為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作,，且完成實驗后立即上機檢測,；樣本處理過程中使用的器具耗材應經過無核酶處理,；

各區(qū)域物品均為專用，不得交叉使用,，以免污染,；檢測結束后，應立即對工作臺清潔,；

吸取反應液時,，應盡量避免產生氣泡；上 PCR 儀前,，應注意檢查各反應管是否蓋緊,，以免液體蒸發(fā)造成結果不準確,；

試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻,，并應瞬時離心；

試劑盒內所配陰性和陽性對照在次使用前應全部轉移至標本準備區(qū),，并單獨存放,；

為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管,，并應避免在PCR反應管上進行任何標記,；

檢測過程中使用過的吸頭，應直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內,，檢測結束的PCR 反應管,，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同后丟棄,；工作臺及各種實驗用品應定期用 10%次氯酸,、75%酒精或紫外燈進行消毒；

9.儀器擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置,；不同批號試劑不能混用,；并在有效期內使用。

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