【產(chǎn)品名稱】豬丹毒桿菌PCR試劑盒

【包裝規(guī)格】 50T/盒

【產(chǎn)品方法】實時熒光PCR法

【預(yù)期用途】

適用于豬丹毒桿菌檢測,，可用于臨床豬丹毒桿菌感染的輔助診斷，但不作確診使用,。

豬丹毒桿菌PCR試劑盒【檢驗原理】

豬丹毒桿菌檢測試劑盒針對豬丹毒桿菌的高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針,，在反應(yīng)體系中含豬丹毒桿菌基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進行并釋放熒光信號,。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號進行實時監(jiān)測和輸出,，實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

【主要組成成份】

RT-PCR反應(yīng)液,、混合酶液,、陽性對照、陰性對照,。

【儲存條件及有效期】

避光-20℃以下保存,，避免反復(fù)凍融，有效期為12個月,。

【適用儀器】
ABI 系列,、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 ,、Roche LightCycler R480,、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列,、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀,。

【檢驗方法】

試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體,。

（2）核算當(dāng)次實驗所需要的反應(yīng)數(shù)（n）,，并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計算當(dāng)次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)（1T）+陽性對照數(shù)（1T）+誤差預(yù)留量（1T）+樣本數(shù)

（3）在無菌離心管中加入上述試劑,，充分混勻后瞬時離心,。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

（4）蓋緊PCR反應(yīng)管蓋后將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū),。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存,。

2.樣本準(zhǔn)備（樣本處理區(qū)）

用QIAGEN,、Roche公司DNA提qu試劑盒提取DNA,，具體操作按照其試劑盒說明書操作,。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測標(biāo)本DNA各5μl、終體積25μl/管,，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,，終體積為25μl/管,，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上,。

PCR（PCR擴增區(qū)）

（1）取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置，并記錄放置順序,。

（2）按下表設(shè)置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增,。

注：ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時不選ROX校正，設(shè)置淬滅基團選擇None,。

【參考值（參考范圍）】

1.試劑盒有效性判定：

（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35,。

（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線,，無指數(shù)增長期,。

2.標(biāo)本結(jié)果判定：

（1）陽性：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

（2）可疑：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi),。此時應(yīng)對標(biāo)本進行重復(fù)檢測,，如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長期,，則判定為陽性,，否則為陰性。

（3）陰性：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值＞38或無Ct值,。

【檢驗方法的局限性】

當(dāng)檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的di檢出限shi可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果,。

本試劑盒僅供標(biāo)本初步篩查使用，對于本試劑盒檢測陽性結(jié)果應(yīng)進一步使用培養(yǎng)法進行確診,。

【注意事項】

使用本試劑盒的實驗室,，應(yīng)嚴(yán)格按照國家有關(guān)部分頒布的有關(guān)基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理；

為避免RNA降解,，樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理,；

各區(qū)域物品均為專用,，不得交叉使用,，以免污染；檢測結(jié)束后,，應(yīng)立即對工作臺清潔,；

吸取反應(yīng)液時，應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡,；上 PCR 儀前,，應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊，以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準(zhǔn)確,；

試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,，并應(yīng)瞬時離心；

試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),，并單獨存放,；

為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記,；

檢測過程中使用過的吸頭，應(yīng)直接打到盛有 10%次氯酸的廢物缸內(nèi),，檢測結(jié)束的PCR 反應(yīng)管,，切忌開蓋，并與其他廢棄物品一同后丟棄,；工作臺及各種實驗用品應(yīng)定期用 10%次氯酸,、75%酒精或紫外燈進行消毒；

9.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置,；不同批號試劑不能混用,；并在有效期內(nèi)使用。

【相關(guān)產(chǎn)品】

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