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詳細(xì)介紹
一,、禽傳染性 支氣管炎病毒檢測(cè)試劑盒
二、通用名稱：禽傳染性支氣管炎病毒檢測(cè)試劑盒（實(shí)時(shí)熒光PCR法）
三,、包裝規(guī)格 50T/盒
四,、預(yù)期用途：
適用于禽支氣管炎病毒檢測(cè)，可用于臨床禽支氣管炎病毒感染的輔助診斷,，但不作確診使用,。
五,、禽傳染性支氣管炎病毒檢測(cè)試劑盒原理：
針對(duì)禽支氣管炎病毒基因組高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針,，在反應(yīng)體系中含禽支氣管炎基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào),。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過程中相應(yīng)通道信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析,。
檢驗(yàn)方法
1. 試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
1. 試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體,。
（2）核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)（n）,，并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量,。
n =陰性對(duì)照數(shù)（1T）+陽性對(duì)照數(shù)（1T）+誤差預(yù)留量（1T）+樣本數(shù)
| 單反液配制表(每份) | RT-PCR反應(yīng)液 | 15.0 μL |
| 逆轉(zhuǎn)錄酶 | 2.0 μL | |
| Taq酶 | 3.0 μL |
(3)在無菌離心管中加入上述試劑,，充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管,。
2.樣本準(zhǔn)備（樣本處理區(qū)）
用QIAGEN,、Roche公司RNA提取試劑盒提取RNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作,。
3.加樣
在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本RNA各5 μl,、終體積25 μl/管，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上,。陰性對(duì)照和陽性對(duì)照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對(duì)照或陽性對(duì)照品，終體積為25 μl/管,，蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,，轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。
4. PCR（PCR擴(kuò)增區(qū)）
（1）取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,，放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,，并記錄放置順序。
（2）按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,。
| 反應(yīng)體積 | 25 μL | 通道選擇 | FAM通道采集禽白血病病毒熒光信號(hào) |
| PCR 反應(yīng) 條件 | 步驟 | 條件 | 循環(huán)數(shù) |
| 反轉(zhuǎn)錄 | 42℃：10分鐘（min） | 1 | |
| 預(yù)變性 | 95℃：3分鐘（min） | 1 | |
| 預(yù)擴(kuò)增 | 95℃：5秒（s） | 5 | |
| 55℃：40秒（s） | |||
| PCR擴(kuò)增 | 95℃：5秒（s） | 40 | |
| 55℃：40秒（s） （此階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào)） |
注：ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正，設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇 None,。
【參考值（參考范圍）】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽性對(duì)照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35,。
（2）陰性對(duì)照：Ct值＞38或無Ct值,，線形為直線或輕微斜線,，無指數(shù)增長(zhǎng)期,。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,。
（2）可疑：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35～38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35～38范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,，則判定為陽性，否則為陰性,。
（3）陰性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無Ct值。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
| 通道及檢測(cè)結(jié)果 | 標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果解釋 |
| FAM | |
| + | 標(biāo)本中檢出禽白血病病毒RNA |
| - | 標(biāo)本中未檢出禽白血病病毒 RNA |
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1. 當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的檢出限shi可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果。
2. 被檢樣本在采集,、運(yùn)輸,、儲(chǔ)存以及處理過程中操作方式不當(dāng)容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。
3. 樣本在采集,、運(yùn)輸,、儲(chǔ)存以及處理過程中發(fā)生交叉污染，則容易得到假陽性結(jié)果,。
【產(chǎn)品性能指標(biāo)】
產(chǎn)品的檢出限為102 Copies/mL，產(chǎn)品CV值≤5%,。
產(chǎn)品的檢出限為102 Copies/mL，產(chǎn)品CV值≤5%,。
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