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詳細介紹
一,、大鼠Klotho蛋白(KL)ELISA試劑盒詳細介紹
中文名稱:大鼠Klotho蛋白(KL)ELISA試劑盒
規(guī)格: 48T /96T
品牌:臻科生物
種屬:大鼠ELISA試劑盒
檢測波長:450 nm
所需樣本體積: 50ul
適用范圍:僅供科研，不得用于臨床診斷,。
保存及有效期:2-8℃,，六個月
檢測樣本種類:用于測定血清,，血漿及相關(guān)液體等樣本的含量或者表達。例如適合檢測包括血清,、血漿,、尿液、胸腹水,、灌洗液,、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清,、組織勻漿等標本,。
臻科生物供應(yīng)的種屬有：人、大鼠,、小鼠,、豚鼠、兔子,、人,、豬牛羊、雞鴨鵝,、植物ELISA試劑盒等
二,、實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠Klotho蛋白(KL)水平。用純化的大鼠Klotho蛋白(KL)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加大鼠Klotho蛋白(KL)，再與HRP 標記的白介素20(IL-20)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的白介素20(IL-20)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中大鼠Klotho蛋白(KL)濃度,。
三、試劑盒組成
1 | 30 倍濃縮洗滌液 | 20ml×1 瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1 瓶 |
2 | 酶標試劑 | 6ml×1 瓶 | 8 | 標準品（240 pmol/L） | 0.5ml×1 瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12 孔×8 條 | 9 | 標準品稀釋液 | 1.5ml×1 瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1 瓶 | 10 | 說明書 | 1 份 |
5 | 顯色劑A 液 | 6ml×1 瓶 | 11 | 封板膜 | 2 張 |
6 | 顯色劑 B 液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1 個 |
四,、操作步驟
1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
7.溫育：操作同3,。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行,。
五、試劑盒計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，
即為樣品的實際濃度,。
六、注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4．請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔di一孔的OD 值）,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
七．特別提醒
1.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3 的樣品,，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
八．更多優(yōu)勢產(chǎn)品
ZK-03770 大鼠Klotho蛋白(KL)ELISA試劑盒
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ZK-03834 大鼠8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒
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