詳細(xì)介紹
大鼠磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)elisa試劑盒試驗原理:
大鼠磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)elisa試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知待測物質(zhì)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進行檢測,。先將待測物質(zhì)和生物素標(biāo)記的抗體同時溫育,。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過的HRP,。再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A,、B,,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色,。顏色的深淺和樣品中待測物質(zhì)的濃度呈比例關(guān)系,。
【*優(yōu)勢】
1、產(chǎn)品種類齊全,、質(zhì)量可靠,、*、靈敏度高,、效果穩(wěn)定,、易保存、操作簡便
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操作注意事項
1)試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,,不可保存。
2)實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。
3)不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
4)使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A,、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5)使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6)洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7)底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,,有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8)加入試劑的順序應(yīng)*,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
9)按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
10)試劑盒是2-8℃冷藏保存,,樣本是一個月內(nèi)做實驗-20度保存,,三個月以上-80度保存。
樣品收集,、處理及保存方法
1)血清-----操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,,1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2)血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3)細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4)組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,,取上清液
5)保存------如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血,。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍,。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
操作步驟
1)使用前,,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2)根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
3)加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體,。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育1小時。
4)甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
5)每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育30分鐘,。
6)甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
7)每孔加入底物A,、B各50ul,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘,。避免光照。
8)取出酶標(biāo)板,,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9)在450nm波長處測定各孔的OD值,。
ELISA試劑盒結(jié)果判斷與分析
1,、儀器值:于波長450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)(Y),,相應(yīng)的待測物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)(X),,做得相應(yīng)的曲線,樣品的待測物質(zhì)含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。
【特別說明】品牌:臻科生物
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