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牛輪狀病毒（RV）ELISA試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
閱讀：1013 發(fā)布時間：2019-11-18牛輪狀病毒（RV）ELISA試劑盒現(xiàn)貨供應(yīng)
實驗原理
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）,。往預(yù)先包被牛輪狀病毒（RV）捕獲抗體的包被微孔中,，依次加入標(biāo)本、陰性和陽性對照,、HRP標(biāo)記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的牛輪狀病毒（RV）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，判定陰陽性。
樣本處理及要求
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜,，然后1000×g離心20 分鐘,，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
3. 組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,，具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中,，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融,。后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，取上清檢測。
4. 細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
注：標(biāo)本溶血會影響后檢測結(jié)果,，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標(biāo)板 | 96孔 | 48孔 | 無 |
陰性對照 | 0.3mL | 0.3mL | 無 |
陽性對照 | 0.3mL | 0.3mL | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進(jìn)行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
1.嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑。
2.洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3.消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。
4.底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用,。
5.避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。
6.在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7.平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
8.任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9.不能使用過期產(chǎn)品,。
10.如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用,。
20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。
操作步驟
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2. 設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加,。
4. 除空白孔外,，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min,。
5. 棄去液體,，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL）,，靜置1min,，甩去洗滌液，吸水紙上拍干,，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）,。
6.每孔加入底物A、B各50μL,，37℃避光孵育15min,。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi),，在450nm波長處測定各孔的OD值,。
實驗結(jié)果計算
1. 陰性對照OD值：小于0.2。
2. 陽性對照OD值：大于0.8,。
3,、陽性判斷（Cut-Off值）：陰性對照OD值+0.15，樣本OD值大于閾值,，判定為陽性,，反之，為陰性,。