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雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒使用說明書
閱讀：860 發(fā)布時(shí)間：2019-4-8| 提 供 商 | 上海臻科生物科技有限公司 | 資料大小 | 43KB |
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| 資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 860次 |
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雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名：雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Infectious Bronchitis Virus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒,、96T×2/盒
【預(yù)期用途】 雞傳染性支氣管炎是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus，IBV）引起雞的一種急性,、高度接觸傳染性呼吸道傳染病,，本病呈世界性分布,，是嚴(yán)重危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疫病之一,。疫苗免疫是預(yù)防和控制雞傳染性支氣管炎發(fā)生的有效途徑,，而免疫后抗體水平的高低反映實(shí)際的疫苗免疫效果，直接關(guān)系到免疫雞群對(duì)禽流感病毒的抵抗力,。
本試劑盒適用于：雞血清抗體的檢測(cè)，以確定被檢雞是否感染過雞傳染性支氣管炎病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平；評(píng)估雞群感染IBV的風(fēng)險(xiǎn)程度,；了解雛雞母源抗體水平,，為IBV免疫程序的制定提供參考。
【原 理】
本試劑盒系由預(yù)包被雞傳染性支氣管炎病毒重組N蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí),，在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和稀釋的待檢血清,，經(jīng)溫育后，若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒的抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合,，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合,；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液,，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標(biāo)儀在450nm波長測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有傳染性支氣管炎病毒抗體,。
【試劑盒組成】
序號(hào) | 名稱 | 規(guī)格（96T×1） | 規(guī)格（96T×2） |
1. | 酶標(biāo)板 | 96T×1 | 96T×2 |
2. | 酶標(biāo)記物 (紅蓋) | 11ml×1 | 11ml×2 |
3. | 樣品稀釋液 (黃蓋) | 50ml×1 | 50ml×1 |
4. | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1 | 40ml×1 |
5. | 底物液A (白蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
6. | 底物液B (黑蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
7. | 終止液 (黃蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
8. | 陽性對(duì)照 (紅蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
9. | 陰性對(duì)照 (綠蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
10. | 蓋板膜 | 1張 | 2張 |
11. | 自封袋 | 1個(gè) | 1個(gè) |
12. | 說明書 | 1份 | 1份 |
【儲(chǔ)存及有效期】 于2～8℃避光保存,，有效期為12個(gè)月。
包被板開封后請(qǐng)于2～8℃避光保存,，避免受潮,。使用期限為2個(gè)月。
【適用儀器】 含450nm,、630nm波長的酶標(biāo)儀,，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器,。
【樣品準(zhǔn)備】
1.取動(dòng)物全血按常規(guī)方法制備血清,，要求血清清亮，無溶血,、無污染,。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存,。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中,，混勻）。陰、陽性對(duì)照不用稀釋,。
3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【檢驗(yàn)方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘,，恢復(fù)至室溫,。
2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)空白對(duì)照1孔,、陰性/陽性對(duì)照各2孔,，未用的板條盡快密封，2～8℃保存,。
3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl,；陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰,、陽性對(duì)照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,，置37℃反應(yīng)30分鐘,。
5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次，拍干,。
6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應(yīng)30分鐘。
7.洗滌,，同步驟5,。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,，混勻,，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
9.每孔加終止液50μl,，混勻,，用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測(cè)定各孔吸光值（A值）,。
【參考值】 實(shí)驗(yàn)正常的情況下,，陰性對(duì)照≤0.10，陽性對(duì)照≥0.6,。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1.C.O（臨界值）=0.13+陰性對(duì)照孔均值（陰性對(duì)照孔均值低于0.07時(shí)以0.07計(jì)算）,。
2.未曾免疫雞群：樣品A值≥C.O為陽性,；樣品A值＜C.O為陰性。
3.免疫雞群：監(jiān)測(cè)并記錄樣本當(dāng)時(shí)的抗體水平,，根據(jù)結(jié)果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動(dòng)向,。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒IgG抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng),、中、弱的粗略評(píng)估,。
【注意事項(xiàng)】
1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套,、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度,，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物,，如不慎接觸請(qǐng)立即用大量自來水沖洗,。
3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存,。
4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶,，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。
5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體,，防止孔口有游離酶不能洗凈,。
6.用于檢測(cè)的樣品應(yīng)保持新鮮。
7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
8.不同批號(hào)試劑組分不得混用,。