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雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒使用說明書
閱讀：941 發(fā)布時間：2019-4-8雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
使用說明書
【產(chǎn)品名稱】
通用名：雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）
英文名：Test Kit for Antibodies to Infectious Bronchitis Virus (ELISA)
【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒
【預期用途】 雞傳染性支氣管炎是由傳染性支氣管炎病毒（Infectious Bronchitis Virus,，IBV）引起雞的一種急性、高度接觸傳染性呼吸道傳染病,，本病呈世界性分布,，是嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的主要疫病之一。疫苗免疫是預防和控制雞傳染性支氣管炎發(fā)生的有效途徑,，而免疫后抗體水平的高低反映實際的疫苗免疫效果,，直接關系到免疫雞群對禽流感病毒的抵抗力。
本試劑盒適用于：雞血清抗體的檢測,，以確定被檢雞是否感染過雞傳染性支氣管炎病毒或免疫雞體內(nèi)抗體水平,；評估雞群感染IBV的風險程度；了解雛雞母源抗體水平,，為IBV免疫程序的制定提供參考,。
【原 理】
本試劑盒系由預包被雞傳染性支氣管炎病毒重組N蛋白的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成,，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒抗體,。實驗時，在酶標板中加入對照血清和稀釋的待檢血清,，經(jīng)溫育后,，若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒的抗體，則將與酶標板上抗原結合,，經(jīng)洗滌除去未結合的抗體和其他成分后,；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結合,；再經(jīng)洗滌除去未結合的酶結合物,，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產(chǎn)物,，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關,；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色,；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有傳染性支氣管炎病毒抗體。
【試劑盒組成】
序號 | 名稱 | 規(guī)格（96T×1） | 規(guī)格（96T×2） |
1. | 酶標板 | 96T×1 | 96T×2 |
2. | 酶標記物 (紅蓋) | 11ml×1 | 11ml×2 |
3. | 樣品稀釋液 (黃蓋) | 50ml×1 | 50ml×1 |
4. | 20X濃縮洗滌液 | 40ml×1 | 40ml×1 |
5. | 底物液A (白蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
6. | 底物液B (黑蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
7. | 終止液 (黃蓋) | 6ml×1 | 11ml×1 |
8. | 陽性對照 (紅蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
9. | 陰性對照 (綠蓋) | 1.0 ml×1 | 1.5 ml×1 |
10. | 蓋板膜 | 1張 | 2張 |
11. | 自封袋 | 1個 | 1個 |
12. | 說明書 | 1份 | 1份 |
【儲存及有效期】 于2～8℃避光保存,，有效期為12個月,。
包被板開封后請于2～8℃避光保存,，避免受潮。使用期限為2個月,。
【適用儀器】 含450nm,、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備,，可調(diào)微量移液器,。
【樣品準備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮,，無溶血,、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存,，長期需置-20℃保存,。
2.用樣品稀釋液將待檢血清按100倍稀釋（如2μl血清加入198μl樣品稀釋液中，混勻）,。陰,、陽性對照不用稀釋。
3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解,，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋,。
【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫,。
2.取所需用量酶標板條,，設空白對照1孔、陰性/陽性對照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存,。
3.空白對照孔加樣品稀釋液100μl,；陰、陽性對照孔分別加入陰,、陽性對照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
4.混勻,，置37℃反應30分鐘,。
5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，重復洗滌5次，拍干,。
6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）,。置37℃反應30分鐘,。
7.洗滌，同步驟5,。
8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl，混勻,，37℃避光反應10分鐘,。
9.每孔加終止液50μl，混勻,，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。
【參考值】 實驗正常的情況下,，陰性對照≤0.10,，陽性對照≥0.6。
【檢驗結果的解釋】
1.C.O（臨界值）=0.13+陰性對照孔均值（陰性對照孔均值低于0.07時以0.07計算）,。
2.未曾免疫雞群：樣品A值≥C.O為陽性,；樣品A值＜C.O為陰性。
3.免疫雞群：監(jiān)測并記錄樣本當時的抗體水平,，根據(jù)結果分析抗體水平的分布及雞群免疫狀態(tài)的動向,。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒IgG抗體，根據(jù)A值高低可作抗體水平強,、中,、弱的粗略評估。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套,、穿工作衣,，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理,。
2.終止液具有腐蝕性,，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗,。
3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋,，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶,，使用時需恢復至室溫以*溶解,。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈,。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮,。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。