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斑馬魚I型膠原蛋白（Col-I）ELISA試劑盒說明書
閱讀：100 發(fā)布時間：2025-6-12斑馬魚I型膠原蛋白（Col-I）ELISA試劑盒說明書
l 本試劑盒用于體外定量檢測血清,、血漿,、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中斑馬魚I型膠原蛋白（Col-I）的含量,。
l 有效期：6個月
l 保存條件：2-8℃
試劑盒組成：
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
標準品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
生物素標記抗體 | 6mL | 3mL | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩沖液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
備注：
1. （96T/48T）打開包裝后請及時檢查所有物品是否齊全。
2. 標準品濃度依次為：40,、20,、10、5,、2.5,、0 ng/mL
3. 經(jīng)過大量正常標本檢驗，標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),，實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可,。當有部分樣本值超過最大標準品濃度時，可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋后再進行實驗,。
檢測前準備工作：
1. 請?zhí)崆?/span>20分鐘從冰箱中取出試劑盒,，平衡至室溫。
2. 從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,，屬于正?，F(xiàn)象；放置室溫,，輕搖均勻,，待結(jié)晶完quan溶解后再配置洗滌液?？蓪?/span>20ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水稀釋配置成400ml工作濃度的洗滌液,，未用完的放回4℃
3. 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水,。,。
實驗原理：
試劑盒采用雙抗體二步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被斑馬魚I型膠原蛋白（Col-I）捕獲抗體包被微孔中,，依次加入標本,、標準品孵育，加入生物化抗體進行抗體生物素化,，經(jīng)過溫育并徹di后加入HRP標記的檢測抗體,，經(jīng)過溫育并徹di洗滌。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的斑馬魚I型膠原蛋白（Col-I）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，計算樣品濃度。
實驗所需自備試驗器材：
1. 酶標儀（450nm）
2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL,、20-200uL,、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
樣本處理及要求：
1. 血清：將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜，然后1000×g離心20 分鐘,，取上清即可,，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融,。
2. 血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融,。
3. 組織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果），稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對應體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣品對應9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,，并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組織細胞,，可以對勻漿液進行超聲破碎，或反復凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，取上清檢測。
4. 細胞培養(yǎng)物上清：請1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)⑸锨逯糜?/span>-20℃或-80℃保存，但應避免反復凍融,。
5. 其它生物標本：1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測。
6. 樣品外觀：樣品應清澈透明,，懸浮物應離心去除,。
7. 樣品保存：樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃，若不能及時檢測,，請按一次使用量分裝,，凍存于-20℃（1個月內(nèi)檢測），或-80℃（6個月內(nèi)檢測），避免反復凍融,，標本溶血會影響最后檢測結(jié)果,，因此溶血標本不宜進行此項檢測。
注意事項：
1. 嚴格按照規(guī)定的時間和溫度進行溫育以保證準確結(jié)果,。所有試劑都必須在使用前達到室溫20-25℃,。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導致不準確的結(jié)果,。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體,。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,，否則影響OD值,。
4. 底物顯色液應呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍的底物液不能使用,。
5. 避免試劑和標本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果,。
6. 在儲存和溫育時避免強光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上,。
8. 任何反應試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強烈氣體,。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應試劑的生物活性。
9. 不能使用過期產(chǎn)品,。
10. 如果可能傳播疾病,，所有的樣品都應管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置,。