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山羊免疫球蛋白A（IgA）ELISA試劑盒
閱讀：870 發(fā)布時間：2020-1-1山羊免疫球蛋白A（IgA）ELISA試劑盒
本試劑盒僅供研究使用,。
檢測范圍： 96T
3µg/ml -100µg/ml
使用目的：
本試劑盒用于測定山羊血清,、血漿及相關液體樣本中免疫球蛋白 A（IgA）含量。
山羊免疫球蛋白A（IgA）ELISA試劑盒實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中山羊免疫球蛋白 A（IgA）水平,。用純化的山羊
免疫球蛋白 A（IgA）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入免疫
球蛋白 A（IgA）,，再與 HRP 標記的免疫球蛋白 A（IgA）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗
體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在
酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白 A（IgA）呈正相關,。用
酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中山羊免疫球蛋白 A （IgA）濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（200µg/ml） 0.5ml×1 瓶 3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份 5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個 標本要求1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
山羊免疫球蛋白A（IgA）ELISA試劑盒操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
100µg/ml 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
50µg/ml 4 號標準品 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
25µg/ml 3 號標準品 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
12.5µg/ml 2 號標準品 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
6.25µg/ml 1 號標準品 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、
待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,，
然后再加待測樣品 10µl（樣品終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡
量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復 5 次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl,，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。
操作程序總結(jié)： 計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度,。
山羊免疫球蛋白A（IgA）ELISA試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存,。
2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間
控制在 5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔di一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計
算時請后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6.底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個月