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雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)原理及操作步驟

雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

    本試劑盒系由預(yù)包被雞傳染性支氣管炎病毒重組N蛋白的酶標(biāo)板,、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成,，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測(cè)雞血清或血漿中雞傳染性支氣管炎病毒抗體,。實(shí)驗(yàn)時(shí),，在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和稀釋的待檢血清,，經(jīng)溫育后,，若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒的抗體,，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后,；再加入酶標(biāo)記物,，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,，在孔中加TMB底物液,，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān),；加入終止液終止反應(yīng)后,，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值,，即可知樣品是否含有傳染性支氣管炎病毒抗體,。

 

雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒檢驗(yàn)方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫,。

2.取所需用量酶標(biāo)板條,，設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔,，未用的板條盡快密封,，2～8℃保存。

3.空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl,；陰,、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl,；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl,。

4.混勻，置37℃反應(yīng)30分鐘,。

5.扣去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，重復(fù)洗滌5次,，拍干,。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應(yīng)30分鐘,。

7.洗滌,，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A,、底物液B各50μl,，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘,。

9.每孔加終止液50μl,，混勻，用空白孔調(diào)零,，于450nm(可用630nm作參比波長）測(cè)定各孔吸光值（A值）,。