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孔雀石綠檢測試劑盒樣本前期處理以及注事事項有哪些?
閱讀:1623 發(fā)布時間:2019-9-12孔雀石綠檢測試劑盒樣本前期處理以及注事事項有哪些,?
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實驗器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實驗結(jié)果,。
5.2 配液:
配液1:1×樣品復溶液
以100 ml為例,,取10 ml 10×復溶液加入50ml去離子水和40ml甲醇,充分混勻,。
配液2:1×工作洗滌液
將濃縮洗滌液20倍稀釋(1份洗滌液加19份去離子水),。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 魚、蝦
1)取勻質(zhì)無骨的樣品1 g,,加入50 ml離心管中,,加入0.3 ml 乙腈、6 ml乙酸乙酯,,充分震蕩(不少于5分鐘,,確保魚肉沒有結(jié)塊);
2)室溫下4000r/min 離心10min,,取上清液3 ml加入10ml玻璃試管中,,再加入氧化劑50 ul,震蕩2分鐘,;
3)每管加入助溶劑50 ul(不振蕩),,50℃水浴環(huán)境下氮氣吹干(吹完之后管底部應(yīng)該有一滴液狀物,當樣本含油脂過高時,,此時可見試管底部殘留有黃色粘稠狀液滴),;
4)加入1 ml 1×樣品復溶液,溶解混勻,,取50ul用于分析,。
樣本稀釋倍數(shù):2 檢測下限:0.1ppb
6 注意事項
6.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒有回到室溫(25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
6.2 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,,則會出現(xiàn)標準曲線不成線性,,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作,。
6.3 混合要均勻,,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,,很大程度上取決于洗板的一致性,。
6.4 在所有孵育過程中,用蓋板膜封住微孔板,,避免光線照射,。
6.5 不要使用過了有效期的試劑盒,,不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),,應(yīng)當棄之,。0標準的吸光度值小于0.5個單位(A450nm< 0.5 )時,表示試劑可能變質(zhì),。
6.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,,避免接觸皮膚。