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有效期:4年
別名:17-0180-02
英文名稱:DEAE-Sephadex A-50
儲(chǔ)存條件:RT
外觀（性狀）:白色粉末
單位:瓶
規(guī)格:25g, A-50產(chǎn)品簡(jiǎn)介
DEAE-SephadexA-50(二乙基氨基乙基葡聚糖A-50)為弱堿性陰離子交換劑,。用NaOH將CL-型轉(zhuǎn)變?yōu)镺H-型后，可吸附酸性蛋白,。血清中的γ球蛋白屬于中性蛋白(等電點(diǎn)為PH6.85-7.5)，其余均屬酸性蛋白,。在PH7.2-7.4的環(huán)境中,，酸性蛋白均被DEAE-Sephadex A-50吸附，只有γ球蛋白不被吸附,。因此,，通過柱層析γ球蛋白便可在洗脫中先流出,而其他蛋白則被吸附在柱上,從而便可分離獲得純化的IgG。
產(chǎn)品參數(shù)
產(chǎn)品名稱：DEAE-Sephadex A-50
基質(zhì)：Sephadex
顆粒大?。?0-120μm
最大流速：45cm/h
工作pH：2-9
操作溫度：室溫
保存條件：室溫
A-50實(shí)驗(yàn)步驟
1,、預(yù)處理稱DEAE-Sephadex A-50(下稱A-50)5克，懸于500ml蒸餾水,，1小時(shí)后傾去上層細(xì)粒,。
按每克A-50加0.5M NaOH 15ml的比例，將A-50浸泡于0.5M NaOH中,，攪勻,，靜置30分鐘，裝入布氏漏斗(墊有2層濾紙)中抽濾,，并反復(fù)用蒸餾水抽洗至PH呈中性,；再以
0.5M HCl同上操作過程處理，最后以0.5M NaOH再處理一次,。處理完后,，將A-50浸泡于0.1M，PH 7.4 PB中過夜,。
2,、裝柱(1)將層析柱垂直固定于滴定鐵架上,，柱底墊一園尼龍紗，出水口接一乳膠或塑料管并關(guān)閉
開關(guān),。
(2)將0.1M,，PH7.4 PB沿玻璃棒倒入柱中至1/4高度，再倒入經(jīng)預(yù)處理并以同上緩沖液調(diào)
成稀糊狀的A-50,。待A-50凝膠沉降2-3cm厚時(shí),，啟開出水口螺旋夾，控制流速1ml/分鐘,，同時(shí)連續(xù)倒入糊狀A(yù)-50凝膠至所需高度。
(3)關(guān)閉出水口,，待A-50凝膠沉降后,，柱面放一園形濾紙片，以橡皮塞塞緊柱上口,，通
過插入橡皮塞之針頭及所連接的乳膠或塑料管與洗脫液瓶相連接,。
3、平衡
啟開出水口螺旋夾,，控制流速12-14滴/分鐘,，使約2倍床體積的洗脫液流出。并以PH計(jì)與電導(dǎo)儀分別測(cè)定洗脫液及流出液之PH值與離子強(qiáng)度是否相同,。達(dá)到一致時(shí)關(guān)閉出水口,，停止平衡。
4,、加樣及洗脫
啟開上口橡皮塞及下口螺旋夾,，使柱中液體緩慢滴出，當(dāng)柱面液體與柱面相切時(shí),，立即關(guān)閉出水口,，以毛細(xì)滴管沿柱壁加入樣品(體積應(yīng)<床體積的2％，蛋白濃度以<100mg為宜),。松開出水口螺旋夾使柱面樣品緩慢進(jìn)入柱內(nèi),，至與柱面相切時(shí)，立即關(guān)閉下口,，以少量洗脫液洗柱壁2-3次,；再放開出水口，使洗液進(jìn)入床柱,，隨后立即于柱面上加入數(shù)ml洗脫液,，緊塞柱上口，使整個(gè)洗脫過程成一密閉系統(tǒng),。并控制流速12～14滴／分鐘,。
5,、 收集
開始洗脫的同時(shí)就以試管進(jìn)行收集。每管收集3～5ml,。共收集10～15管,。
6、測(cè)蛋白
以751-G型紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定每管OD280nm,，與OD260nm,，按前述
公式計(jì)算各管蛋白含量。并以O(shè)D280nm為縱座標(biāo),，以試管編號(hào)為橫座標(biāo),，繪制洗脫曲線。7,、合并,、濃縮
將洗脫峰的上坡段與下坡段各管收集液分別進(jìn)行合并，以PEG(MW6000)洗縮至所需體積,，加入0.02％NaN３防腐劑,，于
4℃保存?zhèn)溆谩?br style="box-sizing: border-box; padding: 0px; margin: 0px;"/>8、A-50凝膠的再生
在柱上先以2M NaCl洗柱上的雜蛋白至流出液的OD280nm<0.02,，再以蒸餾水洗去柱中鹽,。然后按預(yù)處理過程將A-50再處理一遍即達(dá)再生。近期用時(shí)泡于洗脫緩
沖液中４℃保存,；近期不用時(shí),，以*洗2次，再置50℃溫箱烘干,，裝瓶?jī)?nèi)保存,。
(四) 注意事項(xiàng)
1 .柱的選擇：從理論上說，只要柱足夠長,，就得獲得理想的分辨率,，但由于層析柱流速同
壓力梯度有關(guān)，柱長增加使流速減慢,，峰變寬,，分辨率降低。柱的直徑增加,，使液體流動(dòng)的不均勻性增加,，分辨率明顯下降。
2. 純化過程必須嚴(yán)格控制脫緩沖液的PH及離子強(qiáng)度,。樣品與A-50凝膠必須用洗脫緩沖
液平衡后,，才能進(jìn)行柱層析。
3.所裝的柱床必須表面平整,，無溝流及氣泡,，否則應(yīng)重裝,。4.洗脫過程中應(yīng)嚴(yán)格控制流速，且勿過快,。
5. 上樣的體積要小,，濃度不宜過高。
6.加樣及整個(gè)洗脫過程中,，嚴(yán)防柱面變干,。
  備注：產(chǎn)品信息可能會(huì)有優(yōu)化升級(jí)。請(qǐng)以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn),。
注意：：
1. 本產(chǎn)品僅供科研使用,。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療,，食品及化妝品等用途,。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。
2. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和口罩操作,。