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Millipore Amicon Ultra超濾離心管應用：

 • 生物樣品濃縮：包括抗原,、抗體、酶,、核酸或微生物

 • 組織培養(yǎng)提取物或細胞裂解液中大分子組分的純化

 • 對稀釋或從柱洗脫液預先純化的蛋白質進行濃縮

 • 脫鹽和緩沖液更換

Millipore Amicon Ultra超濾離心管訂購信息：

改進了垂直膜的設計,，Amicon Ultra-0.5系列性能更好,，離心時間更短

Amicon Ultra-4系列,，用于濃縮物體積 1–4mL 的合適裝置

Amicon Ultra-4 超濾管超濾管使用離心管和蓋裝配。

Amicon Ultra-15系列,，用于濃縮物體積 <15 mL

Amicon Ultra-15 超濾管超濾管使用離心管和蓋裝配

蛋白濃縮和換Buffer通常使用的超濾管，常用Millipore的Amicon-Ultra-15超濾管（MWCO10kD）,。也有其它型號 的,、不同體積大小和MWCO超濾管可選，視目的蛋白的分子量與濃縮前體積,、濃縮目標體積而定,。可重復使用,，使用一次就扔掉太浪費,。

1、選擇合適的超濾管,，主要考慮MWCO和濃縮體積，最常見的是Ultra-15（10kD）,。到底選擇多大截留分子量比較合適呢,？10kDa、 5kDa,、還是30kDa,？通常應截留分子量不應大于目的蛋白分子量的1/3，比如目的蛋白分子量為35kDa,，就可以選擇10kDa截留分子量的超濾 管,。若目的蛋白分子量為10kD左右，則可以用截留分子量3kD的超濾管,。認真閱讀使用說明書,，注意超濾膜對各種化學物質的耐受程度有所不同，表格中有,。

2,、新買來的超濾是干燥的，使用前加入MilliQ水,，水量*過膜,，冰浴或冰箱里預冷幾分鐘。然后將水倒出,，即可加入蛋白液,，加入的多少，以不超過管頂的白線為準,。操作要輕,，加入蛋白液前,，超濾管需要插在冰上預冷。

3,、平衡,。質量和重心二者都要達到平衡。注意轉速和加速度不可太快,，否則直接損壞超濾膜,。開始離心超濾（離心機預冷至4度）。不同離心機的轉速 rpm換算成g之后,，有所不同,。具體可參閱附件里的說明書。離心機的加速度調至比較低檔,，減小對膜的壓力,。注意，一定要等離心機達到目的轉速之后,，方可離開 離心機,，否則離心機出問題時，無法第一時間處理,，后果不可預測,！膜與轉軸的方向根據說明書調整（角轉離心機的情況是膜與軸垂直）。在實際使用中,，一般轉速 開的比說明書里的要低,，這樣可以延長離心管的使用壽命。

4,、當濃縮到剩下1ml時,，【取50ul國產Bradford溶液，加入10ul流穿,，看有沒變藍色,，以此判斷超濾管是否漏掉蛋白。如果管漏了,，將 上層和流穿重新倒入新管中開始超濾,。要精確判斷是否漏管，用5mg/ml的BSA離心10min,，再取流穿,，跑蛋白膠或Bradford粗測】，繼續(xù)加入 剩下的蛋白液濃縮（在冰上操作,，防止蛋白受熱）,，直到所有濃縮液都加完為止。離心過程中注意是否發(fā)生蛋白沉淀,，導致堵管,。若發(fā)生沉淀,，要確定沉淀的具體原 因，是蛋白濃度過高還是Buffer不合適,；前者可用多根超濾管同時超濾,，降低濃度的辦法解決，后者的方法是換不同的Buffer,，直到蛋白不發(fā)生沉淀為 止,。

5、前面幾步用以濃縮蛋白,，如果要換Buffer,，在總蛋白液濃縮至1ml左右的時候，輕輕加入新的Buffer（經0.22um超濾膜超濾）,，再 濃縮至1ml左右,，連續(xù)三次，最后一次的濃縮終體積根據需要的蛋白濃度而定,，一般不多于500ul,，也有濃縮至200ul以內的情況。按照每次至少10倍 左右的體積濃縮算,，三次達到1000倍以上,，基本上可以達到換buffer的目的。

6,、取出最終蛋白濃縮液的操作在冰上操作，用黃槍頭（200ul）取,，輕輕順著邊緣插入槍頭,，輕輕吹打、混勻蛋白液,，注意不要碰到超濾膜,，然后吸取 濃縮液，每次吸接近200ul,，直到吸完,。管底剩下的最后一點濃縮液不必吸取，否則難度太大,，有可能損壞超濾膜,。最后加入MilliQ水到超濾管中，沒過 超濾膜,，防止膜失水變干,。

7、以下是處理超濾管,，重復利用超濾管的步驟,。

8,、倒出超濾管里的水，用milliQ水輕輕潤洗幾次,，【若管底有可見的蛋白沉淀,，可以先加入水，然后用槍頭吹打,，注意不要碰到膜,，吹打至沉淀懸 起，然后倒掉,，不可用自來水猛沖】然后加入0.2M的NaOH溶液,，室溫放置20min，期間平衡超濾管,。再離心10min,。倒出殘留的NaOH溶液，將 管芯浸入MilliQ水的燒杯(1或2L)中,放置幾個小時,再換新的水,放置幾個小時,，不斷稀釋NaOH濃度,。50ml管和蓋子用自來水洗，內壁再用 MilliQ水洗干凈,。

9,、取出浸沒的管芯，加至接近滿的MilliQ水,，50ml管也加滿MilliQ水,，將管芯慢慢放入50ml離心管，排出部分水,，然后蓋上蓋子,，放4度保存，直到下次使用,。一般來說,，按照上述步驟和注意事項，每根管用三四年不會壞,。

問：超濾管能重復使用嗎,？

答：可以。一般也就用個一兩次就換新的,，網絡顯示可用2-5次,。

用離心管濃縮一種蛋白，可以考慮使用,，先用緩沖液洗滌,，再用去離子水反復洗滌。殘留蛋白雜質多時，可以0.1N NaOH 清洗以及0.1% SDS清洗,，去除和溶解蛋白質及其他雜質的,。然后將超濾離心管的超濾膜泡在疊*鈉溶液或20%的乙醇溶液中，防止長菌,，而且防干,，只要超濾膜侵了水，就不可以再讓它干,，否則超濾膜的分子結構就變了,。

不可以用超聲洗滌！

注意：

1. 本產品僅供科研使用,。請勿用于醫(yī)藥,、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途,。請勿存放于普通住宅區(qū),。

2. 為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作,。

超濾管化學兼容性



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