 |
上海吉至生化科技有限公司
主營產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進(jìn)口 100g |
8
聯(lián)系電話
|
上海吉至生化科技有限公司
主營產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進(jìn)口 100g |
聯(lián)系電話
| 參考價 | ￥ 275 |
| 訂貨量 | 1 個 |
更新時間：2021-02-22 16:38:42瀏覽次數(shù)：313
聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,，謝謝!
| 供貨周期 | 一周 | 規(guī)格 | 500微孔(50T) |
|---|---|---|---|
| 貨號 | PC0020-500微孔(50T)-1 |
產(chǎn)品簡介：
堿性條件下,，蛋白將Cu2+還原為Cu+,， Cu+與BCA試劑形成紫藍(lán)色的絡(luò)合物,，測定其在562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比,，即可計算待測蛋白的濃度,。常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100,，Tween不影響檢測結(jié)果,，但受螯合劑(EDTA, EGTA)、還原劑（DTT,，巰基乙醇）和脂類的影響,。實驗中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高,，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,。
操作說明：
一. 微孔酶標(biāo)儀法
1. 配制工作液：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液,，充分混勻(混合時可能會有渾濁,，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定,。
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取10μL BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至100μL（樣品一般可用PBS稀釋）,，使終濃度為0.5mg/mL。將標(biāo)準(zhǔn)品按0, 2, 4, 6, 8, 12, 16, 20μL加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中,，加PBS補足至20μL,。
3. 將樣品作適當(dāng)稀釋（多做幾個梯度，如作2倍,、4倍,、8倍稀釋），加20μL到96孔板的樣品孔中,。由于移液器在取小量樣品時誤差偏大,，標(biāo)準(zhǔn)線前面的點可能不很準(zhǔn)確，所以盡可能的讓樣品點落在標(biāo)準(zhǔn)線1/2后,。
4. 各孔加入200μL BCA工作液,，37℃放置15-30分鐘。用酶標(biāo)儀測定A562nm,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出蛋白濃度,。使用溫箱孵育時，應(yīng)注意防止因水分蒸發(fā)影響檢測結(jié)果,。
二. 分光光度計法 如沒有酶標(biāo)儀,，可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。 步驟如下：
1. 配制工作液: 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量,，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液,，充分混勻(混合時可能會有渾濁,，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定,。
2. 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取100μL BSA標(biāo)準(zhǔn)品用PBS稀釋至1mL（樣品一般可用PBS稀釋）,，使終濃度為0.5mg/mL。
3. 取八支（或者更多）5mL離心管,，標(biāo)上號,，按下表加入試劑。
4.37℃放置15-30分鐘,。用分光光度計測562nm處吸光值,，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出蛋白濃度。
注意事項：
1. 長期不用時,，Cu試劑與PBS稀釋液可置于2-8℃保存,，如發(fā)現(xiàn)細(xì)菌污染則應(yīng)丟棄。BCA試劑在低溫條件下出現(xiàn)結(jié)晶沉淀時,，可37℃溫育使其*溶解, 不影響使用,。
2. 樣品中若含有較多干擾物質(zhì)時，請采用Bradford蛋白濃度測定試劑盒,。
3. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
