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DAPI染色原理介紹

2022-6-15 閱讀(3193)

DAPI 是一種可以與 DNA 進行強力結(jié)合的常用的熒光染料,。DAPI 結(jié)合至雙鏈 DNA小溝 的AT堿基對位置,一個 DAPI分子 可占據(jù)約三個堿基對位置,。結(jié)合到 雙鏈DNA 上的 DAPI分子 后的熒光強度大約可提高20倍,,一般采用熒光顯微鏡進行觀測即可,,依據(jù)熒光強度可以確定出DNA的量,。此外,因 DAPI 可透過完整的細胞膜,,也可用于 活細胞 和固定細胞的染色,。在熒光顯微鏡下進行觀察,DAPI染料 是利用紫外光波長的光線進行激發(fā),。單獨 DAPI 的最大吸收波長是340nm,,DAPI的最大發(fā)射波長是488nm;當 DAPI 與 雙鏈DNA 進行結(jié)合,,DAPI的最大吸收和發(fā)射波長分別為:364nm,,454nm(10 mM Tris pH7.0,100 mM NaCl,,10 mM EDTA),,其發(fā)散光的波長范圍含蓋了藍色至青綠色。DAPI也可與RNA進行結(jié)合,,但產(chǎn)生的熒光強度只有約為DNA結(jié)合的熒光強度的1/5,,其發(fā)散光的波長范圍約在500nm左右。




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