 |
上海吉至生化科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進(jìn)口 100g |
會(huì)員.png)
8
聯(lián)系電話
|
上海吉至生化科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 潮霉素b,DTT二硫蘇糖醇,Albumin BovineⅤ 牛血清白蛋白Ⅴ,Zeocin 博萊霉素 1.25ml -20℃ （125mg）,IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 進(jìn)口 100g |
聯(lián)系電話
2020-9-18 閱讀(2029)
不同的重組DNA分子獲得的轉(zhuǎn)化子中鑒定出含有目的基因的轉(zhuǎn)化子即陽性克隆的過程就是篩選,。
成熟篩選方法如下：
插入失活法：
外源DNA,、片段插入到位于篩選標(biāo)記基因（抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因）的多克隆位點(diǎn)后，會(huì)造成標(biāo)記基因失活,，表現(xiàn)出轉(zhuǎn)化子相應(yīng)的抗生素抗性消失或轉(zhuǎn)化子顏色改變,，通過這些可以初步鑒定出轉(zhuǎn)化子是重組子或非重組子。常用的是β-半乳糖苷酶顯色法即藍(lán)白篩選法,。
PCR篩選和限制酶酶切法：
提取轉(zhuǎn)化子中的重組DNA分子作模板,，根據(jù)目的基因已知的兩端序列設(shè)計(jì)特異引物，通過PCR技術(shù)篩選陽性克隆,。PCR法篩選出的陽性克隆,，用限制性內(nèi)切酶酶切法進(jìn)一步鑒定插入片段的大小。
核酸分子雜交法：
制備目的基因特異的核酸探針,，通過核酸分子雜交法從眾多的轉(zhuǎn)化子中篩選目的克隆,。目的基因特異的核酸探針可以是已獲得的部分目的基因片段,或目的基因表達(dá)蛋白的部分序列反推得到的一群寡聚核苷酸,或其它物種的同源基因。
免疫學(xué)篩選法：
獲得目的基因表達(dá)的蛋白抗體,，就可以采用免疫學(xué)篩選法獲得目的基因克隆,。這些抗體即可是從生物本身純化出目的基因表達(dá)蛋白抗體，也可從目的基因部分ORF片段克隆在表達(dá)載體中獲得表達(dá)蛋白的抗體,。
