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上海吉至生化科技有限公司
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2020-7-1 閱讀(1035)
DAPI溶液,，也稱DAPI dihydrochloride,，是一種可以穿透細(xì)胞膜的藍(lán)色熒光染料,，和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強(qiáng)20多倍的熒光,。和EB(ethidium bromide)相比,，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍,。因為DAPI是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū),。
盡管DAPI不能通過活細(xì)胞膜,，但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平,，能用來檢測酵母線粒體DNA,，葉綠體DNA，病毒DNA,，microplasm DNA以及染色體DNA,。DAPI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為360nm和460nm。
DAPI染色常用于細(xì)胞凋亡檢測,，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測,。DAPI也常用于普通的細(xì)胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。
1,、用1mL ddH2O將DAPI溶解,，制得2.9mM的DAPI溶液（1mgDAPI/1mL H2O）。
DAPI不能直接用PBS等緩沖溶液溶解,，需要先用水將其溶解,。
2,、取適量DAPI水溶液加到PBS中，制備成10~50µM的DAPI溶液,。 推薦以下PBS的配制方法： 將8.00g NaCl,、0.20g KCl、2.9g Na2HPO4·12H2O,、0.2g KH2PO4溶解于1L純水中,。
3、將1/10培養(yǎng)基體積的DAPI溶液加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中,。也可以1/10濃度的DAPI緩沖液代替培養(yǎng)基,。
4、在37℃培養(yǎng)細(xì)胞10~20分鐘,。
5,、用PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。
6,、用帶有360nm激發(fā)波長,，460nm發(fā)射波長的濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。
