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DEPC正確使用須知以及注意事項

2019-10-8 閱讀(7979)

DEPC中文名為焦碳酸二乙酯,。分子式為C6H10O5,分子量為162.14。是一種強烈但不*的RNA酶抑制劑。通過和RNA酶的活性基團組氨酸咪唑環(huán)結合使蛋白質變性,,從而抑制酶的活性,常用于生物實驗中RNA的提取等,。

DEPC毒性須知:
1.DEPC 是一種烷化劑,。DEPC不穩(wěn)定,在水溶液中會分解成乙醇和二氧化碳,,155℃時也會分解,。DEPC遇到氨水會發(fā)生反應產生氨基甲酸乙酯。

2.DEPC有刺激性,,對眼睛和氣道粘膜有強刺激,在操作中應盡量在通風的條件下進行,,DEPC毒性并不是很強,,但吸入的毒性是很強的,使用時戴口罩,,不小心沾到手上注意立即沖洗,。

3.DEPC是一種潛在的致癌物質,主要是能生成乙酯基衍生物和乙酯類衍生物,,其中尿烷是一種已知的致癌物質,。

DEPC用途:
 DEPC是一種有效的核酸酶抑制劑,它能夠與很多酶的-NH,,-SH或-OH等基團發(fā)生反應,,從而破壞酶的活性位點。一般,,常用濃度為0.1%(1 L水中加入1 mL DEPC)的DEPC來作為RNA酶的抑制劑,。比如,進行RNA實驗時,要用DEPC處理實驗所用的水和各種溶液,。

通常說的DEPC(處理)水是指用DEPC處理過并經高溫高壓消毒的MiliQ純水,。DEPC(處理)水可以用于RNA沉淀的溶解,含有RNA的各種反應體系如反轉錄,、siRNA的退火等,,以及其它各種要求無RNase、DNase和proteinase的反應體系,。

實驗室操作中容易產生的誤區(qū):

1.重復使用含DEPC的水處理槍頭,、離心管等。由于DEPC較貴,,而且書上說DEPC要用高壓滅菌處理去除,,于是有些人就萌發(fā)了重復使用DEPC的想法,即對含有DEPC的水不進行高壓滅菌,,從而重復使用含DEPC的水處理槍頭,、離心管等。節(jié)約本是好事,,但這樣的節(jié)約是無效的,。為什么不能重復使用含DEPC的水,因為DEPC在水溶液中不穩(wěn)定,,極易分解,,DEPC在pH6.0和pH7.0的PBS緩沖液中的半衰期分別約為20分鐘和10分鐘,DEPC在水中的半衰期約為30分鐘,。因此,,重復使用含DEPC的水就不能保證槍頭和離心管的RNase-free。

2.必需長時間高壓滅菌來*去除DEPC,。用DEPC處理過的溶液,,在15-20分鐘的高壓滅菌后還可以聞到一股特殊的香味,因此有人認為高壓滅菌去除DEPC不*,,所以要延長高壓滅菌的時間以*去除DEPC,。但是延長高壓滅菌的時間并不需要,因為聞到的特殊香味不是DEPC的,,而是DEPC分解產物之一的乙醇同溶液中殘留的微量的羧酸(如甲酸和乙酸等)反應產生的揮發(fā)性脂類,。這種特殊的水果香味不代表有痕量的DEPC殘留。

3.溶液中DEPC含量約高,,滅活RNase的效果越好,。這個誤區(qū)錯了一半,的確,,1% DEPC能滅活高達1000 ng/ml的RNase A,,而0.1% DEPC只能滅活少于500 ng/ml的RNase A。但是溶液中殘留的DEPC副產物會抑制一些酶反應,例如DEPC副產物會抑制體外轉錄反應,,因此DEPC含量越高,,高壓滅菌后的DEPC副產物就越多,抑制越明顯,。



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