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農(nóng)藥殘留的兩種主要檢測(cè)方法講解
閱讀：14703 發(fā)布時(shí)間：2020-9-27農(nóng)藥殘留主要檢測(cè)方法有兩種：
1.色譜檢測(cè)法：
色譜檢測(cè)法用作農(nóng)殘定量分析，可為農(nóng)藥殘留執(zhí)法提供依據(jù)。色譜法（包括氣相色譜,、液相色譜、氣質(zhì)聯(lián)用等）,。
優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高,、準(zhǔn)確,、定性定量；
缺點(diǎn)：成本高,、操作復(fù)雜,、時(shí)間較長(zhǎng)。
2.速測(cè)儀法：
速測(cè)儀法只能作為農(nóng)殘定性分析,，易于在基層推廣等特點(diǎn),，是目前我國(guó)控制高毒農(nóng)藥殘留的一種有效方法，也是目前國(guó)內(nèi)和我省應(yīng)用*廣泛的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法,。
速測(cè)儀法的主要優(yōu)點(diǎn)：
1,、該方法具有快速方便、前處理簡(jiǎn)便,、成本較低等優(yōu)點(diǎn),，適用于現(xiàn)場(chǎng)定性測(cè)定，特別適合在蔬菜生產(chǎn)基地,、批發(fā)市場(chǎng)及農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)部門開展快速檢測(cè)工作,。
2、該方法可對(duì)有農(nóng)藥殘留的蔬菜進(jìn)行粗篩,，將一部分農(nóng)藥殘留含量較高的蔬菜控制在市場(chǎng)之外,，避免因農(nóng)藥殘留發(fā)生中毒事件。
速測(cè)儀法的主要缺點(diǎn)：
1,、酶試劑易失活,，導(dǎo)致反應(yīng)不穩(wěn)定,，檢測(cè)結(jié)果誤差較大,，重復(fù)性不好，實(shí)際應(yīng)用中的確認(rèn)率大約為60%~70%左右,；
2,、存在檢測(cè)盲區(qū)，只能檢測(cè)有機(jī)磷和氨基甲酸酯兩類農(nóng)藥,，不能檢測(cè)有機(jī)氯類,、菊酯和其它類別的劇毒農(nóng)藥；
3,、不適合檢測(cè)蔥蒜類,、香菜、韭菜,、番茄,、胡蘿卜、茭白,、蘑菇,、花椒等14種容易出現(xiàn)假陽(yáng)性的農(nóng)產(chǎn)品,。
速測(cè)儀的檢測(cè)方法有兩種：
1、速測(cè)卡法（紙片法）
試劑
固有膽堿酯酶和靛酚乙酸酯試劑的紙片（速測(cè)卡）,，pH7.5緩沖液溶液：分別取15.0g磷酸氫二鈉與1.59g無(wú)水磷酸二氫鉀用500mL蒸餾水溶解,。
儀器
常量天平
有條件配備37℃±2℃恒溫裝置。
分析步驟
整體測(cè)定法
表面測(cè)定法（粗篩法）
結(jié)果判定：
1,、結(jié)果以酶被有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥抑制（為陽(yáng)性）,、未抑制（為陰性）表示。
2,、與空白對(duì)照卡比較,，白色藥片不變色或略淺藍(lán)色均為陽(yáng)性結(jié)果。白色藥片變?yōu)樘焖{(lán)色或與空白對(duì)照卡相同,，為陰性結(jié)果,。
3、對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品,，可用其他分析方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量,。
速測(cè)卡法（紙片法）注意事項(xiàng)
1、有些蔬菜如生姜,、蔥,、蒜、辣椒和番茄等汁液中含有破壞酶活性或者使藍(lán)色產(chǎn)物褪色的物質(zhì),，處理這類蔬菜時(shí),，不要讓其汁液太多釋放出來(lái)，不要剪得太碎,，浸提時(shí)間不易過長(zhǎng),，必要時(shí)可采用整枝蔬菜浸提或采用表面測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜,，也可以采取整株（體）蔬菜浸提的方法,，減少色素的干擾。
2,、試紙上的提取液不可太多而溢出試紙,，亦不可太少而使反應(yīng)不*。
3,、*好將每一批樣品處理好后一起加樣,，一面時(shí)間過長(zhǎng)蒸干。
4,、當(dāng)溫度條件低于37℃,，酶反應(yīng)的速度隨之放慢，藥片加液后放置反應(yīng)的時(shí)間相對(duì)延長(zhǎng),，延長(zhǎng)時(shí)間的確定,，應(yīng)以空白對(duì)照卡用（體溫）手指捏3分鐘時(shí)可以變藍(lán),，即可往下操作。注意樣品放置的時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照卡放置的時(shí)間一致才有可比性,。
5,、空白對(duì)照卡不變色的原因：一是藥片表面緩沖溶液加的少，預(yù)反應(yīng)后的藥片表面不夠濕潤(rùn),，二是溫度太低,。
6、如有條件,，將農(nóng)藥速測(cè)卡放在10℃以下保存效果會(huì)更好,，每小包產(chǎn)品開封后*好在三天內(nèi)用完，如用不完,，可放入將有變色硅膠吸潮劑的瓶中密封保存,，如發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥測(cè)速卡的紅色藥片由鮮紅橙色變?yōu)榘档暮旨t色，說(shuō)明紙片已吸潮失效,。
2,、酶抑制率法（分光光度法）
根據(jù)有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥能抑制昆蟲中樞和周圍神經(jīng)系統(tǒng)中乙酰膽堿酶的活性造成神經(jīng)傳導(dǎo)介質(zhì)乙酰膽堿的積累，影響正常傳導(dǎo),，導(dǎo)致昆蟲中毒致死的原理而設(shè)計(jì),。如果蔬菜中不含有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，乙酰膽堿酶水解后,，水解產(chǎn)物可與顯色劑反應(yīng)產(chǎn)生顏色,。如果蔬菜中含有可以抑制乙酰膽堿的活性的有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥，這種酶就不能被水解,，從而無(wú)顯色反應(yīng),。在溶液中加入乙酰膽堿酶和顯色劑，用此判斷有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留是否存在,。
試劑
1.pH8.0緩沖溶液：分別取11.9g無(wú)水磷酸氫二鉀與3.2g磷酸二氫鉀,，用1000mL蒸餾水溶解,。
2.顯色劑：分別取160mg二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和15.6mg碳酸氫鈉,，用20m了緩沖溶液溶解，4℃冰箱中保存,。
3.底物：取25.0mg硫代乙酰膽堿,，加3.0mL蒸餾水溶解，搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。保存期不超過兩周,。
乙酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶液溶解,，3min的吸光度變化ΔAo值應(yīng)控制在0.3以上,。搖勻后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?，保存期不超過四天。
可選用由以上試劑制備的試劑盒,。乙酰膽堿酯酶的ΔAo值應(yīng)控制在0.3以上,。
儀器
1.分光光度計(jì)或相應(yīng)測(cè)定儀及常量天平。
2.分析步驟
樣品處理：選取有代表性的蔬菜樣品,，沖洗掉表面泥土,，剪成1cm左右見方碎片，取樣品1g,，放入燒杯或提取液瓶中,，加入5mL緩沖溶液，振蕩1-2min,，倒出提取液,，靜置3~5min，待用,。
對(duì)照溶液測(cè)試：先于試管中加入2,。5mL緩沖溶液，再加入0.1mL酶液,、0.1mL顯色劑,，搖勻后于37℃放置15min以上（每批樣品的控制時(shí)間應(yīng)一致）。加入0.1mL底物搖勻,，此時(shí)檢液開始顯色反應(yīng),，應(yīng)立即放入儀器比色池中，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值ΔAo,。
樣品溶液測(cè)試：先于試管中加入2.5mL樣品提取液,，其他操作與對(duì)照溶液測(cè)試相同，記錄反應(yīng)3min的吸光度變化值ΔAt,。
結(jié)果的表述計(jì)算
1,、檢測(cè)結(jié)果按公式計(jì)算：
2、抑制率（%）=[（ΔAo-ΔAt）/ΔAo]×100
3,、式中：ΔAo…對(duì)照溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值：
4,、ΔAt…樣品溶液反應(yīng)3min吸光度的變化值：
結(jié)果判定
1、結(jié)果以酶被抑制的程度（抑制率）表示,。當(dāng)蔬菜樣品提取液對(duì)酶的抑制率≥50%時(shí),，表示蔬菜中有高劑量有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥存在，樣品為陽(yáng)性結(jié)果,。陰性結(jié)果的樣品需要重復(fù)檢驗(yàn)2次以上,。對(duì)陽(yáng)性結(jié)果的樣品，可用其他方法進(jìn)一步確定具體農(nóng)藥品種和含量。
深圳市芬析儀器制造有限公司生產(chǎn)的CSY-N10新一代智能型農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀,；是根據(jù)農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)方法（NY/T 448-2001）和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T5009.199-2003）中的酶抑制率法,，嚴(yán)格遵循《GB/T5009.199-2003蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)》中的規(guī)定對(duì)蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)。深芬儀器農(nóng)藥殘留檢測(cè)儀廣泛應(yīng)用于各級(jí)政府蔬菜檢測(cè)中心,、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng),、超市、環(huán)保機(jī)構(gòu),、蔬菜種植基地,、飯店、車載及實(shí)驗(yàn)室等食品安全檢測(cè)與監(jiān)控場(chǎng)所等單位對(duì)果蔬中農(nóng)藥殘留的檢測(cè),。能準(zhǔn)確,、快速檢測(cè)出蔬菜、水果,、糧食,、茶葉以及土壤中有機(jī)磷和氨基甲酸脂類農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)。
酶抑制率法注意事項(xiàng)
1,、蔥,、蒜、蘿卜,、韭菜,、芹菜、香菜,、茭白,、蘑菇及番茄汁液中，含有對(duì)酶有影響的植物次生物質(zhì),，容易產(chǎn)生假陽(yáng)性,。處理這類樣品時(shí)，可采取整株（體）蔬菜浸提,。對(duì)一些含葉綠素較高的蔬菜,，也可采取整株（體）蔬菜浸提方法，減少色素的干擾,。
2,、當(dāng)溫度條件低于37℃，酶反應(yīng)的速度隨之放慢,，加入酶液和顯色劑后放置反應(yīng)的時(shí)間應(yīng)相對(duì)延長(zhǎng),，延長(zhǎng)時(shí)間的確定,，應(yīng)以膽堿酯酶空白對(duì)照測(cè)試3min的吸光度變化ΔAo值在0.3以上,，即可往下操作。注意樣品放置時(shí)間應(yīng)與空白對(duì)照溶液放置時(shí)間一致才有可比性。膽堿酯酶空白對(duì)照溶液3min的吸光度變化ΔAo值<0.3的原因：一是酶的活性不夠,，二是溫度太低,。
3、當(dāng)吸光度大到無(wú)法讀取時(shí),，說(shuō)明測(cè)定液渾濁有干擾,。
4、待測(cè)樣品放入分光光度計(jì)速度的影響,。待測(cè)樣品加入底物后,，應(yīng)馬上搖勻，放入測(cè)定儀,，否則影響數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性,。
5、比色杯的透光度影響,。保持比色杯的清潔,，使比色杯有好的透光度是減少檢測(cè)誤差的必要性。比色杯可定期用乙醇進(jìn)行清洗,。
6,、微量移液器的影響。微量移液器要,，貼上標(biāo)簽,，避免交差使用造成實(shí)際污染：堅(jiān)持只吸不進(jìn)的原則，防止試劑污染,。
7,、藥品配制過程中的影響。磷酸鹽緩沖液的配制一定要用蒸餾水,、純凈水或者離子水,，不可使用礦物質(zhì)水，否則在測(cè)量過程中干擾較大,，影響準(zhǔn)確性,。