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CAS:121714-22-5/鈣熒光探針Fluo-3 AM
CAS:121714-22-5,Fluo-3 AM [ 鈣熒光探針Fluo-3 AM ]
CAS#:121714-22-5
中文名:鈣熒光探針Fluo-3, AM
英文名:1-[2-Amino-5-(2,7-dichloro-6-hydroxy-3-oxo-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, pentaacetoxymethyl ester
分子式:C51H50Cl2N2O23
分子量:1129.85
結構式:
性質:
1. 外觀:紅色粉末
2. 純度:≥90%
3. 產(chǎn)品描述:
Fluo-3, AM是常用的檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的熒光探針之一,。它穿透細胞膜進入細胞后被細胞內(nèi)的酯酶剪切形成Fluo-3,,從而被滯留在細胞內(nèi),Fluo-3若以游離配體形式存在時幾乎是非熒光性的,,但是當它與細胞內(nèi)鈣離子結合后可以產(chǎn)生較強的熒光,,激發(fā)波長為506nm,,發(fā)射波長為526nm。實際檢測時推薦使用的激發(fā)波長為488nm左右,,發(fā)射波長為525~530nm,。可以使用激光共聚焦顯微鏡或流式細胞儀檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化,。
4. 操作說明(for Human T cells)*
(1) 試劑
2 mM的Fluo-3, AM/DMSO(將1mg Fluo-3, AM溶于442µL DMSO)
Pluronic F127
Hanks•balanced salt solution(HBSS)
HEPES buffer saline(10mM HEPES,,1mM Na2HPO4,137mM NaCl,,5mM KCl,,1mM CaCl2,0.5mM MgCl2,,5mM glucose,,0.1% BSA,pH 7.4)
(2) 操作
①. 向Fluo-3, AM/DMSO溶液中加入16.5mg Pluronic F127,,Pluronic F127可以 防止Fluo-3, AM在HBSS中聚合并能幫助其進入細胞,。
②. 用HBSS稀釋Fluo-3, AM溶液,制備4µM的Fluo-3, AM工作液,。
③. 將Fluo-3, AM工作液加入細胞,,在37℃培養(yǎng)20分鐘。
④. 加入5倍體積的含有1%胎牛血清的HBSS,,再繼續(xù)培養(yǎng)40分鐘,。
⑤. 用HEPES buffer saline洗滌細胞3次,然后用HEPES buffer saline使細胞重懸浮,,制成1×105 cells/mL的溶液,。
⑥. 37℃下培養(yǎng)10分鐘,然后用該細胞進行熒光鈣離子檢測,。激發(fā)波長506nm,,發(fā)射波長526nm。
*標記的條件因細胞種類而異,,在每次實驗前,,請先確定條件。以上方法僅供參考,。
儲存條件:-20℃干燥避光保存,,有效期一年。
CAS:121714-22-5/鈣熒光探針Fluo-3 AM
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CAS:121714-22-5/鈣熒光探針Fluo-3 AM