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高效液相色譜柱柱子的清洗介紹
閱讀：7509 發(fā)布時間：2022-5-24
液相色譜柱即使樣品和流動相已做過前處理，也仍難以完成避免柱子受到污染,，因此必須對柱子行清洗,。清洗應(yīng)定期進行，如果在短期內(nèi)分析許多樣品,，則以每日清洗一次為宜,，至少也應(yīng)一周一次，防止有太多的雜質(zhì)在柱上堆積,。
反相柱的常規(guī)洗滌辦法是：分別取甲醇,、甲醇-水各20倍柱體積（既對于一根4.6mmX25cm的柱來說，通常是50-60ml,，而對于9.4mm內(nèi)經(jīng)X50cm的柱來說,，通常是500-600ml） ，使之通過柱子,。然后用流動相平衡（通常仍用20倍柱體積）,，柱一般將恢復(fù)正常。如果選擇性仍和以前不一樣,，則表明還有其他雜質(zhì)留在柱子里,，這時應(yīng)考慮更加嚴(yán)格的清洗：先用20倍柱體積的水，再用相同體積0.05mol/L硫酸,，后用流動相溶劑,。酸洗常能洗下有機溶劑所不能洗下的剩余雜質(zhì)。在低pH值下做長期（一天或更長）清洗是不適宜的,，但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min,，一般對健合相沒有損害,。注意，強堿不能用來清洗任何微粒硅膠柱（不論是健合相還是非健合相）,，因為硅膠骨架會溶解,。對于嚴(yán)重污染的反相柱，只能采用再生的方法,。
液相色譜柱的清洗：
1,、沖洗系統(tǒng)細節(jié)多，尤其注意緩沖鹽在開始實驗之前,，我們需要沖洗并穩(wěn)定系統(tǒng),，在實驗結(jié)束之后，我們也需要使用適當(dāng)?shù)娜軇_洗并保護系統(tǒng),。
2,、置換系統(tǒng)流動相需要沖洗多長時間其實我們很難用時間準(zhǔn)確的說明這個問題，因為沖洗時間會受流速和柱體積的影響,。
所以這里建議大家用沖洗體積來計算,，由于液相系統(tǒng)中的管線和色譜柱都比較細，流速相對比較慢,，所以流動相置換的過程是比較慢的,，需要5~10倍以上的系統(tǒng)體積才能*置換原有的流動相（并非專業(yè)術(shù)語，僅做問題舉例）,，所以只用知道系統(tǒng)體積即可,。
系統(tǒng)體積包含儀器管線體積和色譜柱體積，比如管線體積是1ml,，色譜柱的空余體積是3ml,，系統(tǒng)體積就是4ml，用至少5倍的流動相沖洗,，也就是需要20ml,，10倍體積相當(dāng)于40ml。有了沖洗體積,，結(jié)合流速,，自然就能計算出到底需要多長時間才能把體系置換好，沖洗干凈,，比如,，流速1ml/min時，大概需要20~40分鐘才能*置換系統(tǒng)中原有的流動相,。
3,、實驗結(jié)束之后用什么溶劑保護體系溶劑的選擇取決于色譜柱的類型，比如反相體系,，色譜柱的體系基本為C8,、C18類的,，甲醇和乙腈是比較合適的溶劑，只是注意乙腈不能長期保存在液相系統(tǒng)中,，因為乙腈有聚合的問題；
若是正相體系,，比如氨基柱,、氰基柱等正相色譜柱，正己烷是比較合適的溶劑,，如果是離子交換柱,，用水沖洗體系即可。
4,、如何沖洗緩沖鹽需要格外注意的是,，緩沖鹽在有機相中是不溶解的，所以千萬不能用有機相直接沖洗緩沖鹽體系,，否則鹽顆粒析出會堵塞管線和色譜柱,，一定要有過渡。
這里建議分三個階段沖洗緩沖鹽體系：（1）用大比例水,，小比例有機相沖洗一段時間,，這樣可以保證順利的沖走大部分鹽；（2）加大有機相的比例再沖洗一段時間,；（3）根據(jù)沖洗體積的計算,，確保緩沖鹽已經(jīng)*被置換了之后再改為100%的有機相沖洗一段時間。