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人肺吸蟲抗體（Paragonimus Ab）定性說明書
閱讀：1769 發(fā)布時間：2019-8-15人肺吸蟲抗體（Paragonimus Ab ） 酶聯(lián)免疫 分析試劑 盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用 96T
使用目的：
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中肺吸蟲抗體（Paragonimus Ab）表
達。
實驗原理
本試劑盒應用雙抗原夾心法測定標本中人肺吸蟲抗體（Paragonimus Ab）表達,。用純化的抗
原包被微孔板,，制成固相抗原，可與樣品中肺吸蟲抗體（Paragonimus Ab）相結(jié)合,，經(jīng)洗
滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與 HRP 標記的抗原結(jié)合,，形成抗原-抗體-酶標抗原復
合物，經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的
作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值）,，與 CUTOFF 值
相比較,，從而判定標本中人肺吸蟲抗體（Paragonimus Ab）的存在與否,。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 陽性對照 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 陰性對照 0.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融
2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 編號：將樣品對應微孔按序編號,，每板應設(shè)陰性對照 2 孔,、陽性對照 2 孔、空白對照 1
孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）
2. 加樣：分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照 50μl,。然后在待測樣品孔先
加樣品稀釋液 40μl,，然后再加待測樣品 10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不
觸及孔壁,，輕輕晃動混勻，
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘,。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此
重復 5 次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同 3,。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10.終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行,。
計算和結(jié)果判定：
試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20
臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定：樣品 OD 值< 臨界值（CUT OFF）者為肺吸蟲抗體（Paragonimus Ab）陰
性
陽性判定：樣品 OD 值≥ 臨界值（CUT OFF）者為肺吸蟲抗體（Paragonimus Ab）陽
性
,。
注意事項
1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用,。
2．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存,。
3．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果,。
4．封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染。
5．底物請避光保存,。
6．試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,，使用雙波長檢測時，參考波長為 630nm
7．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。終止液為 2M 的硫酸，使用時必須
注意安全,。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃。
2．有效期：6 個月