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細(xì)胞耗氧率OCR檢測方法

閱讀:591      發(fā)布時(shí)間:2024-7-30
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耗氧量分析是研究代謝的有用工具,。耗氧量測量結(jié)果是細(xì)胞代謝功能,,更具體而言是線粒體功能的關(guān)鍵性指示。通過這類指標(biāo)來探究活細(xì)胞代謝,,可為細(xì)胞功能以及代謝變化在疾病進(jìn)展中的作用提供深入洞察,。

線粒體功能對(duì)細(xì)胞代謝、存活和能量產(chǎn)生至關(guān)重要,。線粒體呼吸受損與病理狀態(tài)(如癌癥,、缺血性再灌注損傷和神經(jīng)退行性疾病)有關(guān),。線粒體毒性也是安全相關(guān)的抗藥性和藥物戒斷癥狀的常見原因,。

R01耗氧量分析可以實(shí)時(shí)測量全細(xì)胞或分離線粒體的耗氧量,是以高通量形式來評(píng)估用于代謝表征的細(xì)胞呼吸以及評(píng)估治療對(duì)線粒體功能毒性作用的一種可靠方法,。它可以使用熒光酶標(biāo)儀在標(biāo)準(zhǔn)微孔板上進(jìn)行有氧代謝的簡單動(dòng)力學(xué)測定,。隨著呼吸作用的進(jìn)行,溶解氧被消耗,,樣品中的氧氣濃度降低,,導(dǎo)致R01 分析的信號(hào)增加,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)耗氧量的測定,。

R01是氧氣敏感的熒光探針,,最大激發(fā)波長為 468nm,最大發(fā)射波長為 603nm,。其熒光通過分子碰撞與氧氣反應(yīng),,O2淬滅在無氧條件下熒光強(qiáng)度更高,反之有氧條件下熒光強(qiáng)度變低,,因此熒光信號(hào)的量與樣品中細(xì)胞外O2的量成反比,,從而BBoxiProbe® R01可被用于監(jiān)測細(xì)胞外氧氣消耗的變化。在測定中,,耗氧由熒光信號(hào)隨時(shí)間的變化計(jì)算,。細(xì)胞耗氧量增加,熒光信號(hào)的變化率增加,;反之,,耗氧量減少,熒光信號(hào)的變化率降低,。

R01O2這種反應(yīng)是非破壞性且可逆的,, R01沒有細(xì)胞毒性,其是化學(xué)穩(wěn)定的,,惰性的,,水溶性的和細(xì)胞不滲透的,不能透過完整的細(xì)胞膜,。因此還可以同時(shí)與糖酵解,, 線粒體膜電位JC-1 ROS和細(xì)胞ATP ,、LDH等檢測的試劑結(jié)合使用,,進(jìn)行多參數(shù)檢測。

R01進(jìn)行細(xì)胞外耗氧檢測方法及其簡單,,不需要適用特殊的儀器設(shè)備,,只需要熒光酶標(biāo)儀之類的熒光讀板設(shè)備即可??梢?/span>用于直接,,實(shí)時(shí)分析細(xì)胞呼吸和線粒體功能。適用于測量各種全細(xì)胞(貼壁和懸浮細(xì)胞),,透化細(xì)胞,各種3D培養(yǎng)物,,組織,,小生物,球體,,支架和基質(zhì),。還適用于分離的線粒體,分離的酶,,細(xì)菌,,酵母和霉菌的細(xì)胞外耗氧情況測量。


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