耗氧量分析是研究代謝的有用工具,。耗氧量測量結(jié)果是細(xì)胞代謝功能,,更具體而言是線粒體功能的關(guān)鍵性指示。通過這類指標(biāo)來探究活細(xì)胞代謝,,可為細(xì)胞功能以及代謝變化在疾病進展中的作用提供深入洞察,。
線粒體功能對細(xì)胞代謝、存活和能量產(chǎn)生至關(guān)重要,。線粒體呼吸受損與病理狀態(tài)(如癌癥,、缺血性再灌注損傷和神經(jīng)退行性疾病)有關(guān),。線粒體毒性也是安全相關(guān)的抗藥性和藥物戒斷癥狀的常見原因,。
BBoxiProbe® R01耗氧率分析OCR(BB-48211)可以實時測量全細(xì)胞或分離線粒體的耗氧量,是以高通量形式來評估用于代謝表征的細(xì)胞呼吸以及評估治療對線粒體功能毒性作用的一種可靠方法,。
它可以使用熒光酶標(biāo)儀在標(biāo)準(zhǔn)微孔板上進行有氧代謝的簡單動力學(xué)測定,。隨著呼吸作用的進行,溶解氧被消耗,,樣品中的氧氣濃度降低,,導(dǎo)致 BBoxiProbe® R01 分析的信號增加,從而實現(xiàn)對耗氧量的測定,。
BBoxiProbe® R01是氧氣敏感的熒光探針,,最大激發(fā)波長為 455 nm,最大發(fā)射波長為 603 nm,。其熒光通過分子碰撞與氧氣反應(yīng),,由O2淬滅,在無氧條件下熒光強度更高,,反之有氧條件下熒光強度變低,,因此熒光信號的量與樣品中細(xì)胞外O2的量成反比,從而BBoxiProbe® R01可被用于監(jiān)測細(xì)胞外氧氣消耗的變化,。在測定中,,耗氧率由熒光信號隨時間的變化計算。細(xì)胞耗氧量增加,,熒光信號的變化率增加,;反之,耗氧量減少,,熒光信號的變化率降低,。
BBoxiProbe® R01與O2的這種反應(yīng)是非破壞性且可逆的,BBoxiProbe® R01沒有細(xì)胞毒性,其是化學(xué)穩(wěn)定的,,惰性的,,水溶性的和細(xì)胞不滲透的,不能透過完整的細(xì)胞膜,。因此還可以同時與糖酵解,, 線粒體膜電位JC-1, ROS和細(xì)胞ATP ,、LDH等檢測的試劑結(jié)合使用,,進行多參數(shù)檢測。
用BBoxiProbe® R01進行細(xì)胞外耗氧檢測方法及其簡單,,不需要適用特殊的儀器設(shè)備,,只需要熒光酶標(biāo)儀之類的熒光讀板設(shè)備即可。
BBoxiProbe® R01采用可見光激發(fā)檢測,,相對于采用紫外光激發(fā)的檢測試劑,,細(xì)胞損傷更低,對細(xì)胞的毒害更小,。結(jié)果更加準(zhǔn)確客觀,。
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