賽默飛液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體,，又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)?，F(xiàn)代賽默飛液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng),、溫度控制系統(tǒng),、色譜柱、檢測(cè)器、信號(hào)記錄系統(tǒng)等部分組成,。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較,，具有高效、快速,、靈敏等特點(diǎn),。對(duì)高沸點(diǎn)、難氣化合物的混合物通過色譜柱核淋洗劑并以實(shí)現(xiàn)分離,。應(yīng)用于生物化學(xué),、生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué),、石油化工等部門,。
檢測(cè)器是賽默飛液相色譜儀的重要組成部分，液相色譜檢測(cè)器的作用是將柱流出物中樣品組成和含量的變化轉(zhuǎn)化為可供檢測(cè)的信號(hào),，常用檢測(cè)器有紫外吸收,、熒光、示差折光,、化學(xué)發(fā)光等,。
1、紫外吸收檢測(cè)器：是目前HPLC應(yīng)用十分廣泛的檢測(cè)器,。其工作原理是朗伯-比爾定律,。這種檢測(cè)器靈敏度高，線性范圍寬,，對(duì)流速和溫度變化不敏感,，可用于梯度洗脫分離。紫外吸收檢測(cè)要求被檢測(cè)樣品組分有紫外-可見光吸收,，而使用的流動(dòng)相無吸收,，或在被測(cè)組分吸收波長(zhǎng)處無吸收。一般選擇在欲分析物有最大吸收的波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè),，以獲得最大靈敏度和抗干擾能力,。在沒有最大吸收時(shí)，可采用末端吸收,。檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇除取決于待測(cè)物質(zhì)的成分和分子結(jié)構(gòu)外,，還必須考慮流動(dòng)相組成、共存組分干擾等因素,。特別是各種溶劑都有一定的透過波長(zhǎng)下限值,，超過這個(gè)波長(zhǎng)，溶劑的吸收會(huì)變得很強(qiáng),，以至于不能很好地測(cè)出待測(cè)物質(zhì)的吸收強(qiáng)度,。下表列出了HPLC中一些常用的溶劑透過波長(zhǎng)的下限,。
2、熒光檢測(cè)器：是一種高靈敏度,、有選擇性的檢測(cè)器,，可檢測(cè)能產(chǎn)生熒光的化合物。熒光檢測(cè)器的原理與熒光分析法相同,，化合物受紫外光激發(fā)后,，發(fā)射出比激發(fā)光波長(zhǎng)更長(zhǎng)的光，稱為熒光或發(fā)射光,。許多藥物和生命活性物質(zhì)具有天然熒光,能直接檢測(cè),，某些不發(fā)熒光的物質(zhì)可通過化學(xué)衍生化生成熒光衍生物，然后進(jìn)行熒光檢測(cè),。其最小檢測(cè)濃度可達(dá)0.1ng／mL,，適用于痕量分析。一般情況下,，熒光檢測(cè)器的靈敏度比紫外檢測(cè)器約高2個(gè)數(shù)量級(jí),，但其線性范圍不如紫外檢測(cè)器寬。近年來,，采用激光作為熒光檢測(cè)器的光源而產(chǎn)生的激光誘導(dǎo)熒光檢測(cè)器增強(qiáng)了熒光檢測(cè)的信噪比，因而具有很高的靈敏度,，在痕量和超痕量分析中得到廣泛應(yīng)用,。
3、示差折光檢測(cè)器：是一種通用的濃度檢測(cè)器,，對(duì)所有溶質(zhì)都有響應(yīng),。某些不能用選擇性檢測(cè)器檢測(cè)的組分，如高分子化合物,、糖類,、脂肪烷烴等，可用示差檢測(cè)器檢測(cè),。示差檢測(cè)器是基于連續(xù)測(cè)定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測(cè)定樣品含量的,。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會(huì)產(chǎn)生折射,。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同,，就可被檢測(cè)，二者相差愈大,，靈敏度愈高,。在一定濃度范圍內(nèi)檢測(cè)器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。
4,、化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器：是近年來發(fā)展起來的一種快速,、靈敏的新型檢測(cè)器,，具有設(shè)備簡(jiǎn)單、價(jià)格低廉,、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn),。其原理是基于某些物質(zhì)在常溫下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，生成處于激發(fā)態(tài)勢(shì)反應(yīng)中間體或反應(yīng)產(chǎn)物,，當(dāng)它們從激發(fā)態(tài)返回基態(tài)時(shí),，就發(fā)射出光子。由于物質(zhì)激發(fā)態(tài)的能量是來自化學(xué)反應(yīng),，故叫作化學(xué)發(fā)光,。當(dāng)分離組分從色譜柱中洗脫出來后，立即與適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)發(fā)光試劑混合,，引起化學(xué)反應(yīng),，導(dǎo)致發(fā)光物質(zhì)產(chǎn)生輻射，其光強(qiáng)度與該物質(zhì)的濃度成正比,。
這種檢測(cè)器不需要光源,，也不需要復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，只要有恒流泵,，將化學(xué)發(fā)光試劑以一定的流速泵入混合器中,，使之與柱流出物迅速而又均勻地混合產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，通過光電倍增管將光信號(hào)變成電信號(hào),，就可進(jìn)行檢測(cè),。這種檢測(cè)器的最小檢出量可達(dá)10～12g。
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