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小鼠角膜內皮細胞

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更新時間:2025-04-09 10:53:01瀏覽次數:274

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產品簡介

供貨周期 現貨 規(guī)格 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實驗 組織來源 眼角膜組織
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詳細介紹

商品詳細介紹:

4.細胞簡介:

分離自眼角膜組織;角膜位于眼球前壁的一層透明膜,約占纖維膜的前1/6,,從后面看角膜呈正圓形,從前面看為橫橢圓形,。角膜厚度各部分不盡相同,,中央部薄。角膜有十分敏感的神經末梢,,如有外物接觸角膜,,眼瞼便會不由自主地合上以保護眼睛。為了保持透明,,角膜并沒有血管,,透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣,。角膜分為五層,,由前向后依次為:上皮細胞層、前彈力層,、基質層,、后彈力層、內皮細胞層,。角膜的高度透明性和光學性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一,,而角膜內皮細胞(CEC)在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內皮細胞是角膜內層的單層細胞,,構成了后彈力層和房水之間的物理屏障,,通過離子“泵"功能調節(jié)角膜中離子濃度和水分,維持角膜的半脫水狀態(tài),,保證角膜的正常厚度和透明度,。一旦角膜內皮細胞功能出現紊亂,常導致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性,。角膜內皮細胞主要功能有:①角膜是的無血管的組織,,具有透明的特性和合成許多蛋白的功能,;②角膜內皮細胞對角膜透明性有重要作用;③角膜內皮細胞通過Na+-K+-ATP活性,,維持角膜和房水內Na+梯度,,防止水分滲入角膜內,維持角膜實質層相對脫水狀態(tài),,維持透明性,。

5.方法簡介:

實驗室分離的采用混合膠原消化結合內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質量檢測:

實驗室分離的經NSE(神經元特異性烯醇化)免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細胞形態(tài)  內皮細胞樣

傳代特性  可傳2-3代

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,,95%,;CO2,5%

產品屬性:

產品名稱

規(guī)格

組織來源

小鼠角膜內皮細胞

5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

眼角膜組織

1.png

實驗報告:

一,、分離與培養(yǎng):

二,、免疫熒光鑒定:


   1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大??;
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),,混懸10s,,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
   3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復此步驟2-3次,,直至組織被消化;
   4,、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
   5,、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;

 

1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,;
   2,、PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min;
   3,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細胞30min,;
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,;
   5、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h;
   6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。

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小鼠角膜內皮細胞人羊膜間充質干細胞英文名稱:人羊膜間充質干細胞1×106提供免疫熒光鑒定報告

人胎盤周細胞英文名稱:人胎盤周細胞1×106提供免疫熒光鑒定報告

人胎盤絨毛膜間質細胞英文名稱:人胎盤絨毛膜間質細胞1×106提供免疫熒光鑒定報告

人羊水干細胞英文名稱:人羊水干細胞1×106提供免疫熒光鑒定報告

人腦微血管內皮細胞英文名稱:人腦微血管內皮細胞5×105提供免疫熒光鑒定報告

人腦膜細胞英文名稱:人腦膜細胞5×105提供免疫熒光鑒定報告

人星形膠質細胞英文名稱:人星形膠質細胞5×105提供免疫熒光鑒定報告
操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基,,90%;優(yōu)質胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現用現配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

 


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