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小鼠心臟纖維原細胞

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更新時間:2023-04-21 15:43:51瀏覽次數(shù):266

聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,,謝謝!

產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實驗 組織來源 心臟組織
小鼠心臟纖維原細胞的相關(guān)產(chǎn)品:人臍動脈平滑肌細胞原代細胞5×105人臍帶間充質(zhì)干細胞原代細胞5×105人臍血DC細胞原代細胞1×106人臍血間充質(zhì)干細胞原代細胞1×106人羊膜間充質(zhì)干細胞原代細胞1×106

詳細介紹

1.png

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

組織來源

小鼠心臟纖維原細胞

5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

心臟組織

商品詳細介紹:

4.細胞簡介:

分離自心臟組織;心臟由心肌細胞和非心肌細胞組成,,非心肌細胞占細胞總數(shù)的70%,,其中90%以上的非心肌細胞由心肌成纖維細胞組成,。纖維細胞是機能不活躍的成纖維細胞。胞體呈梭形,,胞質(zhì)較少,,弱嗜酸性,胞核小,,染色深,。電鏡下可見,細胞中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體均不發(fā)達,。當組織受損時,,纖維細胞可轉(zhuǎn)化為成纖維細胞而參與修復過程。纖維細胞和成纖維細胞是處于不同功能狀態(tài)的同一種細胞,,如在組織損傷后的修復過程中,,纖維細胞可轉(zhuǎn)化為功能活躍的成纖維細胞。纖維細胞較小,,呈多角形,,胞質(zhì)較少,弱嗜酸性,,胞核亦較小,,染色較深,電鏡下粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較少,,高爾基復合體不發(fā)達,。成纖維細胞較大,呈星形或梭形,,有突起,,細胞核呈卵圓形,,染色質(zhì)稀疏,染色淡,,核仁明顯,,胞質(zhì)較多。成纖維細胞能合成和分泌膠原蛋白,、彈性蛋白和蛋白多糖,,形成膠原纖維、彈性纖維和網(wǎng)狀纖維以及基質(zhì)成分,。心肌成纖維細胞主要功能為對心肌細胞起結(jié)構(gòu)支持作用并負責細胞基質(zhì)外的合成,當心肌損傷時能產(chǎn)生旁分泌生長因子,。心肌成纖維細胞是心臟結(jié)締組織中常見的細胞,,可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維,、網(wǎng)狀纖維及有機基質(zhì),,并且在外傷等因素刺激下,部分纖維細胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細胞,,其功能活動也得以恢復,,參與組織損傷后的修復。因此,,對心肌成纖維細胞的生理學研究成為現(xiàn)代心血管領(lǐng)域研究的一個重點,。

5.方法簡介:

實驗室分離的采用膠原消化法制備而來制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測:

實驗室分離的經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長特性  貼壁

細胞形態(tài)  成纖維細胞樣

傳代特性  可傳1-2代

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,,95%,;CO2,5%

操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基,,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存,。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

二,、免疫熒光鑒定:


   1,、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將成1mm3左右大小,;
   2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
   3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,,直至組織被消化,;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
   5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

 

1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
   2,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
   3、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min,;
   4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
   5,、PBS沖洗細胞3次,,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h,;
   6、用PBS沖洗3次,,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

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蛋白激GCN2蛋白抗體 眼發(fā)育相關(guān)基因蛋白ODAG封閉多肽 豚鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成(eNOS) ELISA檢測試劑盒

β-甘露糖苷抗體 乙酰羧化1/ACCα封閉多肽 豚鼠降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)ELISA Kit

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原代內(nèi)皮細胞添加劑英文名稱:原代內(nèi)皮細胞添加劑5mL(100X)

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原代平滑肌細胞低血清添加劑英文名稱:原代平滑肌細胞低血清添加劑5mL(100X)

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