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人腦成纖維細(xì)胞

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
主要用途 僅供科研實(shí)驗(yàn) 組織來(lái)源 腦組織
人腦成纖維細(xì)胞的相關(guān)產(chǎn)品:大鼠角質(zhì)形成細(xì)胞原代細(xì)胞5×105大鼠表皮干細(xì)胞原代細(xì)胞5×105大鼠前脂肪細(xì)胞原代細(xì)胞5×105大鼠脂肪微血管內(nèi)皮細(xì)胞原代細(xì)胞5×105大鼠真皮毛乳頭細(xì)胞原代細(xì)胞5×105

詳細(xì)介紹

商品詳細(xì)介紹:

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

分離自腦組織,;大腦分左右兩個(gè)半球,,大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個(gè)大腦半球的大部分,,它是神經(jīng)元胞體集中的地方,。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì),。每一個(gè)半球都有三個(gè)面,,即外側(cè)面(約占整個(gè)皮質(zhì)面積的1/3),、內(nèi)側(cè)面和底面(占2/3的面積),;半球表面有很多深淺不等的溝或裂,溝或裂之間的隆起叫回,它們大大增加了大腦的表面積,;大腦外側(cè)面重要的溝,、裂有大腦外側(cè)裂、頂枕裂和中央溝,。由于三溝裂之界隔,,使大腦皮質(zhì)組分為額葉、頂葉,、顳葉,、枕葉四大部分。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來(lái),;成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),,其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),,在一定條件下,,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的腦成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起,;6h后細(xì)胞基本貼壁,伸展成梭形,,胞核清晰,,分布較均勻,散在生長(zhǎng),,不聚集成團(tuán),;細(xì)胞生長(zhǎng)迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),,細(xì)胞排列緊密,,有的交叉重疊生長(zhǎng),,平坦、胞體較大,,細(xì)胞質(zhì)透明,,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,,顏色淡,。細(xì)胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。

5.方法簡(jiǎn)介:

實(shí)驗(yàn)室分離的采用胰dan白 - 膠原混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

6.質(zhì)量檢測(cè):

實(shí)驗(yàn)室分離的經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

7.培養(yǎng)信息:

培養(yǎng)基  FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率    2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性  貼壁

細(xì)胞形態(tài)  成纖維細(xì)胞樣

傳代特性  可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液  0.25%胰dan白

培養(yǎng)條件  氣相:空氣,95%,;CO2,,5%

產(chǎn)品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

組織來(lái)源

人腦成纖維細(xì)胞

5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

腦組織

1.png

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

二,、免疫熒光鑒定:


   1,、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,,最后將成1mm3左右大小,;
   2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,;
   3,、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,,置37℃消化10 min后,,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,,直至組織被消化,;
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,,1200r/min 離心10min,,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
   5,、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng),;

 

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),,棄去培養(yǎng)基,,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min,;
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次,,每次10min,,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min,;
   3,、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,,然后在室溫條件下,,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
   4,、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜,;
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次,,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h,;
   6,、用PBS沖洗3次,每次10min,,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。

絲氨45抗體 ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)家族蛋白9封閉多肽 

磷化肝癌缺失基因1抗體 GalNAc-T14封閉多肽 

P21蛋白激活的蛋白激6抗體 β-連環(huán)蛋白/β-連環(huán)/β鏈接封閉多肽 

醛糖還原相關(guān)蛋白質(zhì)抗體 FC段IgE受體α多肽/Fc ε RIα封閉多肽 

Cy5.5標(biāo)記小鼠抗人CD20單克隆抗體 檸檬合成CISY封閉多肽 

雙特異性磷抗體11抗體 LENG1蛋白封閉多肽 

分泌型磷脂A2抗體 中心體相關(guān)蛋白激Nek2封閉多肽 

磷化絲裂原活化蛋白激活化的蛋白激2抗體 炭疽桿菌致死因子LF封閉多肽 

泛蛋白連接抗體 ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白封閉多肽 

甲基轉(zhuǎn)移樣蛋白3抗體 FAM101B蛋白封閉多肽 

英文名稱: FOXA1 細(xì)胞毒性受體NK-p46封閉多肽 

PDZ結(jié)構(gòu)域PDZK6蛋白抗體 脂肪水解LIPJ封閉多肽 

細(xì)胞生長(zhǎng)抑制基因39蛋白抗體 Bcl-2封閉多肽 

泛連接CUL7蛋白抗體 血栓調(diào)節(jié)蛋白封閉多肽 

同源轉(zhuǎn)錄因子DLX5抗體 活化的Notch1蛋白封閉多肽 

FAM59A蛋白抗體 類腫瘤性抗原MA3封閉多肽 

粘結(jié)蛋白SA1抗體 核孔復(fù)合蛋白Nup43封閉多肽 

囊泡胺轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1家族蛋白抗體 含SH2結(jié)構(gòu)域接頭蛋白B封閉多肽 
人腦成纖維細(xì)胞亞油英文名稱:亞油0.2mL

N2添加劑英文名稱:N25mL

B27無(wú)血清添加劑英文名稱:B2710mL

PBS緩沖液英文名稱:PBS500mL

DAPI英文名稱:DAPI10mL(即用型)

Triton X-100英文名稱:Triton X-10010mL

Fluoromount-G熒光封片劑英文名稱:Fluoromount-G熒光封片劑25mL
操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基,,90%,;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,,95%,;二氧化碳,5%,。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存,。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

 


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