產品屬性:
產品名稱 | 規(guī)格 | 組織來源 |
人結腸黏膜上皮細胞 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 結腸組織 |
商品詳細介紹:
4.細胞簡介:
分離自結腸組織,;結腸在右髂窩內續(xù)于盲腸,在第3骶椎平面連接直腸,。結腸分升結腸、橫結腸,、降結腸和乙狀結腸4部分,,大部分固定于腹后壁,結腸的排列酷似英文字母“M",,將小腸包圍在內,。結腸橫切面由內到外依次為:黏膜(上皮層、固有層,、黏膜肌層),,黏膜下層(疏松結締組織),肌層(內環(huán)形,、外縱行兩層平滑肌),,外膜(纖維膜或漿膜),。腸黏膜上皮細胞是機體內外環(huán)境的重要屏障,持續(xù)暴露于大量抗原中,,也是機體面對病原微生物的第一道防線,。因此,腸黏膜上皮細胞除有吸收,、分泌和轉運等重要生理功能之外,,在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞,,在黏膜免疫反應的起始階段發(fā)揮關鍵作用,,它決定黏膜免疫反應的發(fā)生、性質和強度,。探討正常結腸黏膜上皮細胞的分離,、體外培養(yǎng)方法,為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關疾病建立合適的細胞模型,。
5.方法簡介:
實驗室分離的采用先機械分離法,、后膠原消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
6.質量檢測:
實驗室分離的經Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 上皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%胰dan白
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
![1.png 1.png](https://img61.chem17.com/33c3386a40defc475760f2d932f284039e3f2ebbe8fd6cde5455d849ee47becdde7b7a68f62fc2b1.png)
實驗報告:
一,、分離與培養(yǎng): | 二,、免疫熒光鑒定: |
1、無菌條件下,,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將成1mm3左右大??; 2,、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,,置37℃條件下消化10min,,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置,; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,,混懸10s,,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,,重復此步驟2-3次,,直至組織被消化; 4,、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,,1200r/min 離心10min,棄去上清,,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng),; 5、差速貼壁1h后,,吸出培養(yǎng)基,,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
| 1,、待心房肌細胞生長至80%融合時,,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min,; 2,、PBS沖洗細胞2次,每次10min,,然后在4℃條件下,,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3,、PBS沖洗細胞2次,,每次10min,,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min,; 4,、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜,; 5,、PBS沖洗細胞3次,每次10min,,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗,, 37℃條件下放置1h; 6,、用PBS沖洗3次,,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照,。 |
操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基,,90%;優(yōu)質胎牛血清,,10%,。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%,;二氧化碳,,5%。 溫度:37℃,,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%,。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,,現(xiàn)用現(xiàn)配,,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻,。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM,,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
載脂蛋白A1抗體 附睪分泌蛋白4封閉多肽 人髓鞘相關糖蛋白(MAG)ELISA試劑盒
腫瘤抑制基因P53蛋白抗體 鉀離子通道多聚體結構域蛋白8封閉多肽 人髓鞘堿性蛋白抗體(MBP antibody)試劑盒ELISA
缺氧誘導因子1α抑制蛋白/HIF1AN單克隆抗體 胱硫醚γ裂解封閉多肽 人髓鞘蛋白P0(MPZ)ELISA檢測試劑盒
CLEC2D蛋白抗體 巖藻糖轉移8封閉多肽 人髓磷脂P2蛋白(PMP2)ELISA試劑盒
英文名稱: ARP3 BCL7B蛋白封閉多肽 人髓過氧化物特異性抗中性粒細胞胞質抗體IgG(MPO-ANCA IgG)試劑盒ELISA
Smad蛋白相互作用蛋白1抗體 精氨酰tRNA合成封閉多肽 人性鐵蛋白(AIF)檢測試劑盒elisa
核纖層蛋白A抗體 NLRP14蛋白封閉多肽 人性富亮氨核磷蛋白32家族成員E(ANP32E)ELISA試劑盒
外胚層發(fā)育不良蛋白抗體 腫瘤壞死因子α轉換封閉多肽 人性成纖維細胞生長因子(aFGF/FGF-1)試劑盒ELISA
英文名稱: phospho-ATF2 (Thr71) 磷化上皮鈣粘附分子封閉多肽 人四氫生物蝶呤(BH4)ELISA檢測試劑盒
HOXA10抗體 過氧化物體膜蛋白4封閉多肽 人四連接(CLEC3B)ELISA試劑盒
英文名稱: CD38 鞘磷脂沉積病C1樣蛋白1封閉多肽 人死亡相關蛋白1(DAP/DAP1)試劑盒ELISA
神經突觸前膜胞內蛋白13抗體 6號染色體開放閱讀框168封閉多肽 人絲蟲病抗體(IgG4)檢測試劑盒elisa
腺苷單磷活化蛋白激α1/AMPK α 1抗體 磷化胰島受體底物-1封閉多肽 人絲氨肽抑制劑,Kazal 1型(SPINK1)ELISA試劑盒
白介7抗體 富含脯氨蛋白25封閉多肽 人絲氨肽2甘露聚糖結合凝集(MASP2)試劑盒ELISA
水通道蛋白4抗體 麻疹病毒血凝封閉多肽 人絲氨HTRA1(HTRA1)ELISA檢測試劑盒
葡萄糖調節(jié)蛋白78/熱休克蛋白70蛋白5抗體 神經誘導胚胎發(fā)育相關蛋白Churchill封閉多肽 人絲氨/蘇氨激24(STK24)ELISA試劑盒
英文名稱: phospho-JAK2 (Tyr1007+Tyr1008) 轉導β1X連鎖蛋白封閉多肽 人絲氨/蘇氨蛋白激PAK4(PAK4)試劑盒ELISA
FAM55C蛋白抗體 白細胞介27封閉多肽 人絲氨/蘇氨蛋白激B-raf(BRAF)檢測試劑盒elisa
人結腸黏膜上皮細胞TJ905人腦膠質瘤細胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TJ905細胞專用培養(yǎng)基500ML
TOV-112D人上皮性卵巢癌細胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TOV-112D細胞專用培養(yǎng)基125ML
TOV-112D人上皮性卵巢癌細胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TOV-112D細胞專用培養(yǎng)基500ML
TPC-1人乳頭狀甲狀腺癌株細胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TPC-1細胞專用培養(yǎng)基125ML
TPC-1人乳頭狀甲狀腺癌株細胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TPC-1細胞專用培養(yǎng)基500ML
TT人甲狀腺癌細胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TT細胞專用培養(yǎng)基125ML
TT人甲狀腺癌細胞專用培養(yǎng)基英文名稱:TT細胞專用培養(yǎng)基500ML