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                              豬托克特諾病毒PCR檢測試劑盒操作說明

  今日立冬，深秋的江南已漸有寒意,，常綠的喬木已在不經(jīng)意間換上了金色的冬裝,，南渡的雁雀急揮著翅膀匆匆南飛，偶爾有落單的鳥兒一邊悲鳴著一邊奮力的前行,，仿佛在訴說著同伴們的無情與現(xiàn)實的無奈,，甚怕稍稍慢些就會被南下的寒流凍成冰棍，金色的稻田已經(jīng)被勤勞的農(nóng)民搶收完畢,，看上去空蕩蕩的,，只剩下幾顆狼尾草在飄搖，秋風越來越大膽了,，開始變得肆無忌憚起來,，卷起那一地又一地金黃色的梧桐葉，毫不憐香惜玉的把她拋向天空,，再吹落到各個角落直至粉碎化成泥土!接下來介紹豬托克特諾病毒PCR檢測試劑盒操作說明

產(chǎn)品特點:

PCR引物設(shè)計的目的是為了找到一對合適的核苷酸片段,，使其能有效地擴增模板DNA序列。因此,，引物的優(yōu)劣直接關(guān)系到PCR的特異性與成功與否,。

要設(shè)計引物首先要找到DNA序列的保守區(qū)。同時應預測將要擴增的片段單鏈是否形成二級結(jié)構(gòu),。如這個區(qū)域單鏈能形成二級結(jié)構(gòu),，就要避開它。如這一段不能形成二級結(jié)構(gòu),，那就可以在這一區(qū)域設(shè)計引物,。

現(xiàn)在可以在這一保守區(qū)域里設(shè)計一對引物。一般引物長度為15-30堿基,，擴增片段長度為100-600堿基對,。

讓我們先看看P1引物。一般引物序列中G+C含量一般為40%-60%。而且四種堿基的分布隨機,。不要有聚嘌呤或聚嘧啶存在,。否則P1引物設(shè)計的就不合理。應重新尋找區(qū)域設(shè)計引物,。

同時引物之間也不能有互補性,，一般一對引物間不應多于4個連續(xù)堿基的互補。

引物確定以后,，可以對引物進行必要的修飾,，例如可以在引物的5′端加酶切位點序列；標記生物素,、熒光素,、等，這對擴增的特異性影響不大,。但3′端不能進行任何修飾,，因為引物的延伸是從3′端開始的。這里還需提醒的是3′端不要終止于密碼子的第3位,，因為密碼子第3位易發(fā)生簡并,，會影響擴增的特異性與效率。

引物的設(shè)計原則：

1,、引物應用核酸系列保守區(qū)內(nèi)設(shè)計并具有特異性,。

2、 產(chǎn)物不能形成二級結(jié)構(gòu),。

3,、引物長度一般在15~30堿基之間。

4,、G+C含量在40%~60%之間,。

5、堿基要隨機分布,。

6,、引物自身不能有連續(xù)4個堿基的互補。

7,、引物之間不能有連續(xù)4個堿基的互補,。

8、引物5′端可以修飾,。

9、引物3′端不可修飾,。

10,、引物3′端要避開密碼子的第3位。