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魚促卵泡素Elisa試劑盒操作步驟
閱讀：159 發(fā)布時間：2019-6-5| 提 供 商 | 上海邦景實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 15.5KB |
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魚促卵泡素Elisa試劑盒操作步驟
操作步驟如下：
1）將特異性抗體與固相載體結(jié)合,，形成固相抗體,。洗滌除去尚未結(jié)
合的抗體及一些雜質(zhì)。
2）加入待測標(biāo)本,，保溫反應(yīng),。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物,。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì),。
3）加酶標(biāo)抗體，保溫反應(yīng),。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合,。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān),。
4）加底物顯色,。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物,。通過比色，測知標(biāo)本中抗原的量,。在臨床檢驗中,，此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如 HBeAg,、HBsAg,、hCG 、AFP等,。只要獲得針對受檢抗原的特異性抗體,，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清,，包被和酶標(biāo)所使用的抗體分別取自不同種屬的動物,。如應(yīng)用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗,，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物,。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗體一起保溫反應(yīng),，作一步檢測,。
在一步法測定中，當(dāng)標(biāo)本中受檢抗原的含量很高時,，過量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,，而不再形成"夾心復(fù)合物"。類同于沉淀反應(yīng)中抗原過剩的后帶現(xiàn)象,，此時反應(yīng)后顯色的吸光值（位于抗原過剩帶上）與標(biāo)準(zhǔn)曲線（位于抗體過剩帶上）某一抗原濃度的吸光值相同,，如按常法測讀，所得結(jié)果將低于實際的含量,，這種現(xiàn)象被為鉤狀效應(yīng)（hook effect）,，因為標(biāo)準(zhǔn)曲線到達(dá)高峰后呈鉤狀彎落。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時,，反應(yīng)甚至可不顯色而出現(xiàn)假陰性結(jié)果,。因此在使用一步法試劑測定標(biāo)本中含量可異常增高的物質(zhì)（例如血清中 HBsAg、AFP 和尿液 hCG 等）時,，應(yīng)注意可測范圍的zui高值,。用高親和力的單克隆抗體制備此類試劑可削弱鉤狀效應(yīng)。