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小鼠組織多肽抗原（TPA）ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
閱讀：156 發(fā)布時(shí)間：2019-5-23| 提 供 商 | 上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 15.7KB |
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小鼠組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
用途
該試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清,、血漿或其他相關(guān)生物液體中濃度,。
檢測(cè)原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法,。用抗體包被于酶標(biāo)板上,，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會(huì)與包被抗體結(jié)合,，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素,?？贵w與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,，游離的成分被洗去,。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,，加終止液后變成黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值，抗原濃度與OD450值之間呈正比,，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出樣品中指標(biāo)的濃度,。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣：設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL,；。
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）,、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。
3. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,，空白孔除外。
4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘,。
5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用,。
6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
8. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
9. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行,。
試驗(yàn)所需自備物品
1. 酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng)濾光片)
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL
3. 37℃恒溫箱,，雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙