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小鼠17-α甲睪酮(17-αMT)檢測試劑盒樣品收集和注意事項
閱讀:185 發(fā)布時間:2019-1-221. 血清:全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測,,收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)毒素試管,。
2. 血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,,樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,。避免使用溶血,,高血脂樣品。
3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),,稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,,于冰上充分研磨,。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,,或反復(fù)凍融,。zui后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測,。
4. 細胞培養(yǎng)上清:取細胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,,除去雜質(zhì)及細胞碎片。取上清檢測,。
5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,,取上清即可檢測
6. 樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除,。
7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進行檢測的可保存于4℃,,若不能及時檢測,,請按一次使用量分裝,,凍存于-20℃(1個月內(nèi)檢測),或-80℃(6個月內(nèi)檢測),,避免反復(fù)凍融,。
8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,請根據(jù)實際情況,,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實驗,,以確定稀釋倍數(shù))。
(1).實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。
(2).試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,,使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存,。
(3).使用一次性的吸頭以免交叉污染,,吸取終止液和底物A、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器 ,。(4).不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
(5).洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
(6).使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
(7).加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
(8).按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間,、加液的量及順序進行溫育操作。
(9).底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子,。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下,。避免用手接觸,,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值,。